Leber病之线粒体T12338C检测试剂盒及应用

摘要

本发明提供一种Leber病之线粒体T12338C检测试剂盒，由置于盒体内的DNA提取混合液、扩增T12338C的PCR混合液、针对T12338C设计的一对外引物和一对内引物、限制性内切酶PsiⅠ、阳性对照和阴性对照构成。本发明从少量的血液标本、带毛囊的毛发、口腔粘膜刮片或唾液等样本中快速提取基因组DNA，既解决传统上从原发性Leber氏病患者血液中提取DNA的问题，减轻被检者的痛苦，又解决了跨地区传递样本的问题，提高酶切特异性，避免出现假阴性，提高检测结果的稳定性。本发明是一种快速、简便、准确、经济的检测试剂盒。可实行原发性Leber氏病相关的mtDNA T12338C突变的筛查和预防性检查。

主权项

一种Leber病之线粒体T12338C检测试剂盒，由置于盒体（8）内的DNA提取混合液（1）、扩增T12338C的PCR混合液（2）、针对T12338C设计的一对外引物（3）、针对T12338C设计的一对内引物（4）、限制性内切酶PsiⅠ（5）、阳性对照（6）和阴性对照（7）构成，其中提取DNA提取混合液（1）由细胞裂解液和溶液Ⅰ组成；扩增T12338C的PCR混合液（2）试剂有脱氧单核苷酸、10×PCR缓冲液、MgCl₂、三蒸水和DNA聚合酶组成，其特征在于，针对T12338C设计的一对外引物（3）有外前向引物F: TAT CAC TCT CCT ACT TAC AG和外反向引物R: AGA AGG ATA TAA TTC CTA CG，针对T12338C设计的一对内引物（4）有内前向引物F: TTTTAAAGGATAACAGCTATCCATTGGTCTTAGGCCCCAAAAA TTTTGGTGCAACTCCAAATAAAAGTTA 和内反向引物R: GTGGGGAAGAGACTGATAATA；阳性对照（6）是不含有线粒体序列第12338位点发生T>C突变的酶切样本，阴性对照（7）是含有线粒体序列第12338位点发生T>C突变的酶切样本，溶液Ⅰ为蛋白酶K。