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Un método para enriquecer una secuencia diana en una mezcla de reacción, comprendiendo dicho método: a. someter una mezcla de reacción sospechosa de tener un dúplex de secuencia diana y un dúplex de secuencia de referencia a una primera temperatura de desnaturalización que está por encima de la temperatura de fusión (Tm) del dúplex de la secuencia de referencia y del dúplex de la secuencia diana, para permitir la desnaturalización de dicho dúplex de secuencia diana y de dicho dúplex de secuencia de referencia, en el que dicho dúplex de secuencia diana comprende una o más inserciones, supresiones o alteraciones y difiere en al menos un nucleótido de dicho dúplex de secuencia de referencia, y en el que dicha secuencia diana es al menos 50% homóloga a dicho dúplex de secuencia de referencia y es amplificable por el mismo par de cebadores que dicho dúplex de secuencia de referencia, y en el que la secuencia diana es menos predominante en la mezcla de reacción que la secuencia de referencia; b. reducir la temperatura de la mezcla de reacción hasta una temperatura de hibridación para permitir la formación de dúplex de hebra diana/hebra de referencia y evitar la unión de dicho par de cebadores a las hebras diana y de referencia desnaturalizadas en la mezcla de reacción, en el que la temperatura de hibridación está por debajo de la temperatura crítica (Tc) y por encima de la temperatura de hibridación del cebador; c. incrementar dicha mezcla de reacción de amplificación hasta una temperatura crítica (Tc) que está por debajo de la Tm de dicho dúplex de secuencia de referencia, para permitir la desnaturalización preferente de dichos dúplex de la etapa (b) para formar hebras diana y de referencia desnaturalizadas; d. reducir la temperatura de la mezcla de reacción hasta una temperatura de hibridación del cebador para permitir que dicho par de cebadores se hibride a dichas hebras diana y de referencia; y e. alargar dicho par de cebadores para enriquecer dicha secuencia diana con respecto a dicha secuencia de referencia; en el que el método se repite durante dos o más ciclos. |
