酶法拆分外消旋色氨酸<SUP>15</SUP>N制备左旋和右旋色氨酸<SUP>15</SUP>N的方法

摘要

本发明提供了一种酶法拆分外消旋色氨酸¹⁵N制备左旋和右旋色氨酸¹⁵N的方法。该方法包括：配制酶反应液、酶水解拆分N-乙酰-DL-色氨酸¹⁵N、萃取分离L-色氨酸¹⁵N和N-乙酰-D-色氨酸¹⁵N、树脂分离出L-色氨酸¹⁵N、精制出L-色氨酸¹⁵N产品、盐酸水解制备D-色氨酸¹⁵N、等电点沉淀出D-色氨酸¹⁵N并精制成D-色氨酸¹⁵N产品、树脂分离出残留D-色氨酸¹⁵N并精制成D-色氨酸¹⁵N产品等步骤。本发明方法简练，设备易得，产品收率高，可同时获得化学纯和光学纯的L和D两种类型的色氨酸¹⁵N。

主权项

1、一种酶法拆分外消旋色氨酸15N制备左旋和右旋色氨酸15N的方法，其特征在于：以N-乙酰-DL-色氨酸15N为原料，按以下步骤制备：A、配制酶反应液：取一定量的N-乙酰-DL-色氨酸15N，用稀NaOH溶解后配制成浓度为0.05-0.20mol/L的溶液，调节pH＝6-8，加入ZnCl2溶液和磷酸缓冲液，配制成酶反应液；B、酶水解拆分N-乙酰-DL-色氨酸15N：向步骤A所得酶反应液中加入氨基酰化酶，加热反应，N-乙酰-DL-色氨酸15N被拆分为L-色氨酸15N和N-乙酰-D-色氨酸15N；C、萃取分离L-色氨酸15N和N-乙酰-D-色氨酸15N：将步骤B所得溶液浓缩，调节pH为1-3，用乙酸乙酯萃取，L-色氨酸15N进入水相，N-乙酰-D-色氨酸15N进入有机相；D、树脂分离出L-色氨酸15N：将步骤C萃取后所得水相蒸干除去乙酸乙酯，用水溶解，调节pH为1-3，导入强酸性阳离子交换树脂柱吸附，用去离子水流洗柱至检验不出Cl-，然后用稀氨水洗脱，收集含有L-色氨酸15N的洗脱液；E、精制出L-色氨酸15N产品：将步骤D所得含有L-色氨酸15N的洗脱液，经浓缩、去氨、结晶、分离、干燥得到L-色氨酸15N产品；F、盐酸水解制备D-色氨酸15N：将步骤C萃取后所得有机相除去乙酸乙酯，用盐酸调至pH＝1-3，至冰箱中过夜，抽滤得N-乙酰-D-色氨酸15N，然后在氮气保护下，加入盐酸加热水解，得到含D-色氨酸15N的溶液；G、等电点沉淀出D-色氨酸15N并精制成D-色氨酸15N产品：将步骤F所得含有D-色氨酸15N的溶液冷却后用NaOH调至色氨酸的等电点，经结晶、分离、去氯、重结晶、分离、干燥得到D-色氨酸15N产品；H、树脂分离出残留D-色氨酸15N并精制成D-色氨酸15N产品：将步骤G结晶和重结晶后分离所得母液蒸干除去乙醇后按与步骤D、步骤E相同的方法处理得到残留在母液中的D-色氨酸15N产品。