一种微量多肽及蛋白质含量的测定方法

摘要

本发明涉及一种多肽及蛋白质含量的测定，特别是微量(低至几微克)多肽及蛋白质含量的测定方法。本发明的工作原理是多肽蛋白质样品经硫酸消化后，生成硫酸铵，硫酸铵被氢氧化钠分解放出氨，加入奈氏试剂，用分光光度计测定铵盐，并转换成氮含量。本发明由检测试剂的制备、检测方法、蛋白含量计算等步骤组成。它克服了现有技术存在的不适用于微量样品中对多肽和蛋白质进行精确含量测定的问题，具有检测试剂和仪器为常用设备和试剂、检测微克级的某些基因工程或其它来源的多肽及蛋白质的精确度高等优点。

主权项

1、一种微量多肽及蛋白质含量的测定方法，其特征在于它由如下步骤组成：A、检测试剂的制备：a、称取0.2-0.5g硒酸钠，0.1-0.2g硫酸铜，加1.5-2.5N硫酸溶解成500ml作为消化液；浓硫酸14-42ml，加入100-150ml水中，冷却后稀释为1.5-2.5N硫酸；氢氧化钠20-60g，加水溶解至500ml得到1-3N氢氧化钠；b、奈氏试剂的制备：将20-30g碘化钾加水20-30ml溶解制成碘化钾溶液；二氯化汞8-14g加热溶于160ml水制成二氯化汞溶液；将60-80g氢氧化钾加水至350ml溶解制成氢氧化钾溶液；然后将上述二氯化汞溶液倒入碘化钾溶液中，直至生成的红色沉淀不再溶解为止；再将此混合液倒入氢氧化钾溶液中，混匀，加水至500ml，静止取上清；c、含氮量为0.02-0.06mg/ml的标准硫酸铵溶液的制备：取硫酸铵干燥至恒重后，称取0.4720-1.4159g加水至100ml溶解、摇匀，得到含氮量1-3mg/ml标准溶液、冷藏；取上述标准溶液1ml，用水稀释至50ml摇匀；B、检测方法：a、在含氮8～10μg的待测样品中加入消化液1ml，玻璃珠两粒，于通风橱内加热，使被加热液体保持微沸状态；消化3-5小时至溶液呈淡绿色后，加大火力继续消化1-2小时至溶液澄清；冷却后，加入10ml水稀释，再依次加入奈氏试剂0.5ml，2N氢氧化钠，摇匀，放置10-25分钟，于390-410nm与460-480nm波长比色；b、标准硫酸铵曲线：量取含氮量为0.02-0.06mg/ml的标准硫酸铵溶液5份于烧瓶中，每份为0.1-0.5ml，分别补水至0.5ml，加入消化液1ml，玻璃珠两粒，与待测样品同时消化，按B步骤中的a法操作；C、计算出总氮量，从而计算出蛋白含量。