用于鉴定与ZAP-70相互作用的分子和纯化ZAP-70的方法

摘要

本发明在第一方面提供了用于鉴定与ZAP-70相互作用的化合物的方法，该方法包括步骤：a)提供包含磷酸化的ZAP-70的蛋白质制剂，b)在允许氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物形成的条件下使蛋白质制剂与固定在固体支持物上的氨基吡啶并嘧啶配体24接触，c)将氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物与给定的化合物一起温育，和d)确定化合物是否能够将磷酸化的ZAP-70与固定的氨基吡啶并嘧啶配体24分离；在第二方面，本发明涉及用于鉴定与ZAP-70相互作用的化合物的方法，该方法包括步骤：a)提供包含磷酸化ZAP-70的蛋白质制剂，b)在允许氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物形成的条件下使蛋白质制剂与固定在固体支持物上的配体氨基吡啶并嘧啶配体24和与给定的化合物接触，和c)检测在步骤b)中形成的氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物。在第三方面，本发明提供了用于鉴定与ZAP-70相互作用的化合物的方法，该方法包括步骤：a)提供两等份的包含磷酸化的ZAP-70的蛋白质制剂，b)在允许氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物形成的条件下使一个等份与固定在固体支持物上的氨基吡啶并嘧啶配体24接触，c)在允许氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物形成的条件下使另一等份与固定在固体支持物上的氨基吡啶并嘧啶配体24和与给定的化合物接触，和d)确定步骤b)和c)中形成的氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物的量；在第四方面，本发明涉及用于鉴定与ZAP-70相互作用的化合物的方法，该方法包括步骤：a)提供两个各自包含至少一个含有磷酸化的ZAP-70的细胞的等份，b)将一个等份与给定的化合物一起温育，c)收获各等份的细胞，d)裂解细胞以获得蛋白质制剂，e)在允许氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物形成的条件下使蛋白质制剂与固定在固体支持物上的氨基吡啶并嘧啶配体24接触，和f)确定步骤e)中各等份中形成的氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物的量。

主权项

1. 用于鉴定与ZAP-70相互作用的化合物的方法，该方法包括步骤：a)提供包含磷酸化的ZAP-70的蛋白质制剂，b)在允许氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物形成的条件下使蛋白质制剂与固定在固体支持物上的氨基吡啶并嘧啶配体24接触，c)将氨基吡啶并嘧啶配体24-磷酸化的ZAP-70复合物与给定的化合物一起温育，和d)确定化合物是否能够将磷酸化的ZAP-70与固定的氨基吡啶并嘧啶配体24分离。