免疫-扩增

摘要

本发明为临床上相关的样品(例如血液)提供了高度灵敏的、高通量的免疫-扩增测定。该测定包括使用2个邻近成员，后者包含缀合到寡核苷酸上的分析物特异性结合组分。结合分析物使邻近成员的寡核苷酸部分足够接近，以形成扩增子。然后，通过扩增扩增子和检测扩增的核酸，检测分析物的存在。通过防止未与分析物复合的邻近成员形成虚假的或非特异性的扩增子，提高了本发明的测定的灵敏度。在一个实施方案中，使用能结合未彼此杂交的寡核苷酸部分的杂交封闭剂寡核苷酸，防止了目标-非依赖性扩增子形成。通过提供能阻止扩增子形成、直到释放出被捕获的复合物的固相捕捉寡核苷酸，进一步降低了背景。

主权项

1.检测分析物的方法，包括：(i)组合：(a)分析物；(b)第1邻近成员，其包含第1分析物特异性结合实体，后者能与分析物形成复合物，且缀合到包含第一部分的第1寡核苷酸部分上；(c)第2邻近成员，其包含第2分析物特异性结合实体，后者能与分析物形成复合物，且缀合到包含能与第1寡核苷酸的第一部分杂交的部分的第2寡核苷酸部分上；(d)杂交封闭剂寡核苷酸，其中杂交封闭剂寡核苷酸包含能与第1寡核苷酸部分的第一部分形成杂交体的部分；(ii)形成杂交体，其包含第1寡核苷酸部分的第一部分和第2寡核苷酸部分的所述部分，其中杂交体包含第1或第2寡核苷酸部分的3’末端；(iii)延伸该3’末端，以生成扩增子；(iv)扩增扩增子，以生成扩增产物；和(v)检测扩增产物；其中对扩增产物的检测允许检测分析物。