一种Y优系列杂交水稻种质的鉴定方法

摘要

本发明介绍了一种Y优系列杂交水稻种质的鉴定方法，该方法为下述步骤：(1)选出可用于Y优系列杂交水稻种质鉴定的引物；(2)用所得引物对送鉴水稻样品进行PCR扩增；(3)对所得DNA特异标记进行电泳检测；(4)根据所得DNA特异标记分布图制作与送鉴水稻样品对应的分子身份证号码，号码的第一位数为“1”时，只要第二至第五位数中出现一位数为“1”，该送鉴水稻样品为Y优系列杂交水稻，否则鉴定结论相反。利用本方法可鉴定出Y优系列杂交水稻品种及其亲本种质。检测时间短、数量大、效率高，种子纯度鉴定准确，可大大减少杂交水稻大面积生产的风险。

主权项

1、一种Y优系列杂交水稻种质的鉴定方法，该方法为下述步骤：(1)、以下列方式筛选出可用于Y优系列杂交水稻种质鉴定的引物：①、在Gramene数据库中，找到水稻12条染色体，从每条染色体上随机择出5-10个SSR引物，②、从步骤①所得SSR引物中择出可用于鉴定Y优系列杂交水稻种质的引物，这种可用于鉴定Y优系列杂交水稻种质的引物是第5染色体的RM164，所述RM164的DNA序列为：正向序列TCTTGCCCGTCACTGCAGATATCC，反向序列GCAGCCCTAATGCTACAATTCTTC，或第7染色体的RM18，所述RM18的DNA序列为：正向序列TTCCCTCTCATGAGCTCCAT，反向序列GAGTGCCTGGCGCTGTAC，或第10染色体的RM258，所述RM258的DNA序列为：正向序列TGCTGTATGTAGCTCGCACC，反向序列TGGCCTTTAAAGCTGTCGC，或上述引物的组合，(2)、使用上述步骤(1)所得可用于Y优系列杂交水稻种质鉴定的引物对送鉴水稻样品进行PCR扩增：①、利用PCR体系进行PCR扩增，所用PCR体系的成份是：浓度为25ng/μl的DNA模板 1μlPH值为8.3的10×PCR缓冲液 2μl浓度为2.5mM的dNTPs 1μl浓度为5U/μl的Taq酶 0.2μl浓度为10pM的正向序列引物 0.5μl浓度为10pM的负向序列引物 0.5μl去离子无菌水 14.8μl②、利用上述步骤①给出的PCR体系按照以下程序实施PCR扩增：a.94℃温度下对上述PCR体系进行4分钟时间的DNA变性处理；b.94℃温度下对步骤a所得经过DNA变性处理的PCR体系进行45秒钟DNA变性处理；c.52-59℃温度下对上述步骤b给出的PCR体系进行45秒钟复性处理；d.72℃温度下对步骤c所得经过复性处理的PCR体系进行45秒钟DNA合成延伸处理；e.依序重复步骤b～步骤d，重复35～40次；f.72℃温度下对步骤e所得经过35～40次步骤b～步骤d重复处理的PCR体系进行5分钟DNA合成延伸处理，得DNA特异标记，PCR扩增结束，(3)、对步骤(2)所得DNA特异标记进行电泳检测：①、使用聚丙稀酰胺含量为6％的凝胶对步骤(2)所得DNA特异标记进行电泳分离处理，处理时间1.5～2小时；②、对步骤①所得经过电泳分离处理的DNA特异标记进行银染显色处理得DNA特异标记分布图，电泳检测结束，(4)、根据步骤(3)所得DNA特异标记分布图制作与送鉴水稻样品对应的分子身份证号码，具体制作方法是，DNA特异标记分布图中获得扩增的DNA特异标记显示的位置标注数字“1”，未获得扩增的DNA特异标记显示的位置标注数字“0”，由此组成与送鉴水稻样品对应的分子身份证号码，当分子身份证号码的第一位数为“1”时，只要第二至第五位数中出现一位数为“1”，即可作出该送鉴水稻样品为Y优系列杂交水稻的鉴定结论，否则鉴定结论相反。