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1、一种多酚氧化酶模拟酶的制备方法，该方法是：A)将环糊精按质量比为1∶20～30放入去离子水中溶解；然后按环糊精与对甲苯磺酰氯的摩尔比为1∶0.5～1加入对甲苯磺酰氯，在25℃下搅拌反应2～4小时后，按去离子水与对氢氧化钠水溶液的质量比为1∶0.2加入10％(质量百分比浓度)的氢氧化钠水溶液，所得悬浊液继续搅拌15～30分钟，过滤除去不溶物，收集滤液，用氯化铵将滤液的PH值调为8～8.5；将该溶液在4℃下静置10～15小时，过滤，析出白色固体，用去离子水洗涤三次，50～80℃下用蒸馏水重结晶三次，得到亮白色片状晶体；在40～45℃条件下真空干燥，得到6位单取代环糊精磺酸酯；B)将6位单取代环糊精磺酸酯按质量比为1∶30～50加入到N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶解；然后按6位单取代环糊精磺酸酯与碘化钠的摩尔比为1∶8～15加入碘化钠，在90℃下搅拌反应3～5h，在40℃下减压蒸干N，N-二甲基甲酰胺；在产物中加入丙酮，搅拌，过滤，收集滤饼再加入丙酮，重复三次，除去未反应的碘化钠；将所得固体溶于水中，加入丙酮得到沉淀，将其在40～45℃条件下真空干燥即得到碘代环糊精；C)将碘代环糊精按质量比为1∶30～50加入到N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶解；然后按碘代环糊精与组氨酸的摩尔比为1∶8～15加入组氨酸，在60℃、氮气保护下反应24小时；将反应得到的悬浊液进行抽滤、收集滤液后，在40℃减压蒸馏去除溶剂，所得黄色蜡状物用丙酮洗涤至洗出丙酮变无色；所得固体溶于水中并重新用丙酮沉淀，收集沉淀后干燥后即得到环糊精组氨酸衍生物；D)将环糊精组氨酸衍生物按质量比为1∶1000投入PH值为6～9的磷酸盐缓冲液中，待完全溶解后，按环糊精组氨酸衍生物与氯化铜的摩尔比为1∶2～10加入氯化铜，过滤，除去不溶物，加入适量无水乙醇，静置，析出晶体，用无水乙醇洗涤，在20～40℃条件下干燥，得到多酚氧化酶模拟酶。 |
