产毒素B艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法

摘要

本发明涉及一种产毒素B艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法。其中的试剂包括环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂；反应液含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5-AGGAGAAGCAATTGATTTTACTGGA-TACAGCTCCTCTATAATTATCTTCA-3、下游内引物5-AAGTGTATTAGCTGGGGCAAAATAT-TATTTCAACCAAAGTGGAGTGT-3、上游外引物5-TTCACCATCTAATTCTTTCCATTC-3、下游外引物5-CAATTGGAGAGACAATAATTGATG-3和甜菜碱；检测产毒素B艰难梭菌的方法包括细菌DNA的提取、产毒素B 艰难梭菌的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

主权项

1.环介导等温扩增检测产毒素B艰难梭菌的试剂，其特征是该试剂包括(1)-(4)：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、1.0-1.4mmol/L dNTP、4-8mmol/L硫酸镁(MgSO4)、0.8-1.6μmol/L上游引内物(FIP)、0.8-1.6μmol/L下游内引物(BIP)、0.2-0.3μmol/L上游外引物(F3)、0.2-0.3μmol/L下游外引物(B3)和1-1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；其中，上游内引物：5-AGGAGAAGCAATTGATTTTACTGGA-TACAGCTCCTCTATAATTATCTTCA-3；下游内引物：5-AAGTGTATTAGCTGGGGCAAAATAT-TATTTCAACCAAAGTGGAGTGT-3；上游外引物：5-TTCACCATCTAATTCTTTCCATTC-3；下游外引物：5-CAATTGGAGAGACAATAATTGATG-3；(2) UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶：8U/μL；(4)显色剂：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。