甘薯茎尖的包埋玻璃化超低温保存方法

摘要

本发明涉及一种甘薯茎尖的包埋玻璃化超低温保存方法，以甘薯品种的甘薯苗为材料，无需预培养将其茎尖进行包埋。在不同浓度的蔗糖MS溶液中进行包埋后预培养，在玻璃化溶液脱水处理90-120分钟，超低温冷冻保存；冷冻后的恢复培养，不经过愈伤组织直接出芽形成完整的小植株，可以进行大量的无性繁殖。本方法所用材料来源于国内甘薯品种，操作简单，长期冻存后材料恢复生长快。

主权项

一种甘薯茎尖包埋玻璃化超低温保存方法，步骤如下：(1)从甘薯的试管苗上取1～1.5mm甘薯茎尖；将甘薯茎尖移入到浓度为3克/100ml的海藻酸钠和0.2M甘油的无钙离子的MS溶液中，室温浸泡5～20秒；(2)将含有11.1g/l CaCl2、2M甘油、0.2M蔗糖的MS溶液在冰块中预冷15～25分钟，将步骤1的甘薯茎尖连同浸泡溶液一起加入其中，形成直径为0.5 0.8cm甘薯茎尖小球；将甘薯茎尖小球依次移入以下预培养基中进行预培养：将小球移入盛有50ml预培养基I溶液的三角瓶中，预培养基I溶液配方为：MS+30g/l蔗糖+1g/l酪蛋白氨基酸，摇床培养24小时，25～28℃，60～90rpm；将小球移入盛有50ml预培养基II溶液的三角瓶中，预培养基II溶液配方为：MS+0.3M蔗糖，摇床培养16小时，25～28℃，60～90rpm；将小球移入盛有50ml预培养基III溶液的三角瓶中，预培养基III溶液配方为：MS+1.6M蔗糖+2M甘油，摇床培养3小时，25～28℃，60 90rpm；制得预培养好的甘薯茎尖小球；(3)将上述预培养好的甘薯茎尖小球移入盛有20ml PVS玻璃化溶液的三角瓶中，25℃培养90～120min；(4)将步骤(3)处理过的甘薯茎尖小球移入2ml规格的超低温管中，每个管中装8 10个小球，置入液氮中冷冻保存。