一种检测生物膜纤维素酶活性的分析方法

摘要

本发明公开了一种生物膜纤维素酶活的分析方法。具体包括以下步骤：(1)取适量完成培养的生物膜置于烧杯中，用超声波细胞破碎仪进行破碎，频率20KC，破碎5～10分钟，取其中的100ml菌悬液测定MLSS；(2)将剩余的菌悬液离心，取上清液，加入磷酸缓冲液和底物微晶纤维素，恒温条件下反应30分钟；(3)反应结束后，立即加入DNS试剂终止反应，放入沸水浴中加热5min，取出定容，摇匀，用分光光度计测定吸光度，同时做空白实验；(4)计算纤维素酶活性。本发明发法缩短了反应时间；方法简单，易操作，简化了计算过程。

主权项

一种检测生物膜纤维素酶活性的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以已知浓度的葡萄糖溶液为标准溶液，用分光光度计检测其吸光度，以葡萄糖浓度C和吸光度值A制作标准曲线，并得到关系式A＝a·C+b；(2)将完成培养的生物膜，破碎后得到菌悬液，测得MLSS，MLSS为菌悬液的生物膜浓度，单位：g/ml；(3)将菌悬液离心，取1.0ml上清液于25ml比色管，并加入1.0ml磷酸缓冲液和10.0mg底物微晶纤维素，在50℃反应30分钟后，立即加入DNS试剂，沸水浴中加热5min，取出并定容至25ml，测定其吸光度，同样的方法做空白实验；(4)根据关系式A＝a·C+b，计算所测酶液的葡萄糖浓度C和空白实验的葡萄糖浓度C0，C＝(A b)/a，C0＝(A0 b)/a，再计算出样品的纤维素酶活性，计算公式为：x＝(C C0)/(MLSS·T)，式中：x为纤维素酶活性，单位：mg葡萄糖·g 1·h 1；C和C0为葡萄糖浓度，单位：mg/ml；MLSS为步骤(2)得到的菌悬液的生物膜浓度，T为反应时间，单位：h。