一种利用离子交换树脂直接提取蚯蚓纤溶酶的工业化生产方法

摘要

本发明涉及一种利用离子交换树脂直接提取蚯蚓纤溶酶的工业化生产方法，属于生物技术领域。鲜蚯蚓或冷冻蚯蚓加0.14mol/L NaCl、匀浆、搅拌提取、离心上清调节pH7.5-9.5、电导率1-5ml/Ω；加活化的大孔阴离子交换树脂搅拌交换2-4小时，洗涤，3-4mol/L NaCl洗脱；或者树脂装离交柱、动态交换、0.5-4.5mol/L NaCl梯度洗脱；洗脱液冷酒精沉淀或超过滤脱盐、浓缩，低温干燥得蚯蚓纤溶酶。本发明技术产品白色、无异味、易溶于水，生物活性由≥12uku/mg提高到40uku/mg以上，收得率提高10％以上，节约大量化工原料、生产成本降低50％左右。适用于工业化生产。

主权项

利用离子交换树脂直接提取蚯蚓纤溶酶的工业化生产方法，包括：(1)洗净的鲜蚯蚓或冷冻的鲜蚯蚓加0.14mol/L NaCl溶液、匀浆，搅拌提取1 2小时，离心或过滤取上清液，沉渣加0.14mol/L NaCl溶液搅拌提取0.5小时、离心、合并上清，得蚯蚓粗提液；(2)上清液用1mol/L NaOH调节pH7.5 9.5，加无离子水调节离子强度按电导率计至1 5ml/Ω；(3)再用大孔阴离子交换树脂进行静态或动态离子交换，所用大孔阴离子交换树脂是指D254、D290、ZGA351或ZGA451；静态离子交换 阶梯洗脱：加入活化的大孔阴离子交换树脂搅拌交换2 4小时、抽干；常水漂洗、抽干，重复洗涤一次；加入0.8 1.2mol/L NaCl溶液搅拌洗涤、抽干，重复洗涤一次；加入2.5 4.5mol/L pH 5 6NaCl溶液搅拌洗脱2 4小时、抽干、收集洗脱液，重复洗脱1次、合并洗脱液；或者采用动态离交层析 梯度洗脱：活化的树脂装层析柱，步骤(2)获得的上清液上柱，无离子水洗涤，0.5 4.5mol/L pH 5 6NaCl溶液梯度洗脱，收集、合并纤溶酶洗脱峰；(4)洗脱液用冷酒精或冷丙酮沉淀，有机溶剂脱水，真空干燥；或者洗脱液通过超过滤洗涤、浓缩，冷冻干燥，得蚯蚓纤溶酶。