微流控高通量致病性真菌检测方法和试剂盒

摘要

本发明涉及建立一套检测致病性真菌的有无和/或真菌菌种的PCR微流控芯片检测体系，其包括(1)菌株基因组DNA抽提；(2)设计特异性引物，对基因组DNA进行特异性扩增；(3)使用随机引物进一步对真菌基因组DNA进行PCR扩增；(4)运用微流控芯片检测技术对PCR产物进行快速检测鉴定。可用于医院对念珠菌、曲霉、隐球菌等医院内深部真菌的早期诊断，降低器官移植、肿瘤化疗等免疫低下人群病死率。

主权项

一种鉴定和/或检测一种或几种样品中致病性真菌的有无和/或真菌种类的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)提取样品中菌株的DNA；(2)用真菌通用引物对对上述DNA进行PCR扩增，所述的通用引物对为：NL-1：5’-GCATATCGGTAAGCGGA GGAAAAG-3’NL-4：5’-GGTCCGTGT TTCAAGACGG-3’保留大小介于500～700bp的扩增产物所对应的样品；(3)用一条随机引物，对步骤(2)所保留的样品DNA进行PCR扩增并通过微流控芯片检测扩增产物，根据微流控芯片检测图谱所示的谱带与标准致病性真菌图谱比对来分别确定致病性真菌的有无和/或真菌种类；所述的随机引物为：M13：5’-gag ggt ggc ggt tct-3’或(GACA)4：5’-gac aga cag aca gac a-3’。