利用RNAi技术和RNAi rescue原理制备突变型克隆载体的方法及应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种利用RNAi技术和RNAi rescue原理制备突变型克隆载体的方法及应用，包括如下步骤：目的基因RNAi有效靶点设计和载体构建；RNAitarget mRNA区第三个碱基同义突变；多重PCR获得含同义突变的目的基因全长mRNA；突变型克隆载体构建；突变型克隆载体构建成功证明；回复功能实验。本发明的方法通过RNAi沉默基因观察功能变化情况，回复突变的载体与RNAi同时感染或转染目的细胞，一方面沉默内源目的基因，但不沉默外源目的基因，通过外源突变型载体表达与内源相同功能的蛋白，经过这样组合处理细胞功能不发生改变；或者将突变型载体导入RNAi沉默后，功能得到回复，证明功能表型是由此基因引起的。本发明为基因功能研究提供了一种新的模型和方法。

主权项

一种利用RNA干扰技术和RNA干扰回复原理制备突变型克隆载体的方法，包括下列步骤：目的基因RNAi有效靶点设计、构建shRNA载体；RNAi target mRNA区第三个碱基同义突变；多重PCR获得含同义突变的目的基因全长mRNA；突变型克隆载体构建；突变型克隆载体构建成功证明；回复功能实验证实细胞克隆形成。