一种降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法

摘要

一种降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法，它涉及一种产氢细菌的筛选方法。它解决了现在有机废水中筛选得到的产氢菌不适合降解木质纤维素产氢工艺，而且以牛粪堆肥作为天然混合产氢菌来源制备氢气的方法存在产生的气体中杂质多、氢气量少、工艺难以控制的问题。方法：a、菌体富集；b、菌体富集液倍比稀释后进行分离纯化；c、继续分离纯化至得到单一菌落；d、培养单一菌落，检测气相，有氢气产生的即为降解木质纤维素类生物质产氢细菌。本发明得到的菌株在发酵中能够产生氢气，产氢量大、气体中杂质少、产氢工艺容易控制。本发明方法得到的菌株对纤维素的针对性强，在降解纤维素的同时能够同步产氢，适合应用在降解木质纤维素产氢工艺。

主权项

一种降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法，其特征在于降解木质纤维素类生物质产氢细菌的筛选方法按以下步骤实现：a、取10g牛粪堆肥样品放入三角瓶中，加入生理盐水和数颗玻璃珠，在摇床上振荡30min，然后取1mL上清液接种于CM3纤维素滤纸培养基中静置培养一周，得菌体富集液；b、取1mL菌体富集液用厌氧的无菌水进行倍比稀释，再接种于CM3纤维素粉末固体培养基中，制成滚管，分离培养5～7天，然后挑取水解透明圈菌落转接于CM3纤维素滤纸培养基中纯化培养3～4天，得纯菌株；c、纯菌株接种于CM3纤维素粉末固体培养基中，制成滚管，分离培养5～7天，然后挑取水解透明圈菌落转接于CM3纤维素滤纸培养基中纯化培养3～4天，再转接于CM3纤维二糖固体培养基中培养至得到单一菌落；d、将单一菌落接种于CM3纤维素粉末液体培养基中，在37℃、130r/min的条件下振荡培养一周后检测气相，有氢气产生的即为降解木质纤维素类生物质产氢细菌；其中步骤a中生理盐水为充入无菌氮气的生理盐水；步骤a中CM3纤维素滤纸培养基是在改良CM3培养基中加入滤纸条；步骤b中CM3纤维素粉固体培养基是在改良CM3琼脂培养基中加入纤维素粉；步骤c中CM3纤维二糖固体培养基是在改良CM3琼脂培养基中加入纤维二糖；步骤d中CM3纤维素粉液体培养基是在改良CM3培养基中加入pH-101纤维素粉；步骤a中的改良CM3培养基每1000mL由1.5g的KH2PO4、4.2g的Na2HPO4·12H2O、0.5g的NH4Cl、0.18g的MgCl2·6H2O、2.0g的酵母浸粉、0.5g的还原剂L-半胱氨酸、2.00mL质量浓度为0.1％的氧化还原电位指示剂、10mL的微量元素液和余量的水组成，pH值为6.8～7.2；所述的微量元素液每1000mL由0.01g的维生素B12、0.025g的抗坏血酸、0.025g的核黄素、0.02g的柠檬酸、0.05g的吡多辛、0.01g的叶酸、0.01g的对氨基苯甲酸、0.025g的肌酸、0.01g的MnSO4·7H2O、0.05g的ZnSO4·7H2O、0.01g的H3BO3、0.01g的N(CH2COOH)3、0.01g的CaCl2·2H2O、0.01g的Na2MoO4、0.2g的CoCl2·6H2O、0.01g的AlK(SO4)2和余量的水组成；步骤a中滤纸条为经过处理的滤纸裁剪而成，即采用质量浓度为1％的醋酸浸泡滤纸条24h，然后用碘液检查确定无淀粉后，再用质量浓度为2％的苏打水冲洗滤纸条至中性，晾干后裁剪。