| 摘要 |
1. Способ замены последовательности ДНК-мишени посредством гомологичной рекомбинации в Clostridia, включающий: !трансформацию указанного штамма вектором, содержащим: ! ориджин репликации, позволяющий осуществлять его репликацию в Clostridia, и ! замещающую кассету, содержащую первый маркерный ген, окруженный двумя последовательностями, гомологичными выбранным участкам около последовательности ДНК-мишени, позволяющими осуществлять рекомбинацию данной кассеты, и ! второй маркерный ген, ! селекцию штаммов с интегрированной в их геном указанной кассетой, которые экспрессируют первый маркерный ген, ! селекцию штаммов с элиминированным указанным вектором, которые не экспрессируют второй маркерный ген. ! 2. Способ по п.1, где второй маркерный ген представляет собой ген устойчивости к антибиотику. ! 3. Способ по п.1, где второй маркерный ген представляет собой встречно-селектируемый маркер. ! 4. Способ по п.3, где встречно-селектируемый маркер представляет собой ген, который восстанавливает активность несущественного отсутствующего или делетированного гена. ! 5. Способ по п.4, где встречно-селектируемый маркер представляет собой ген upp. ! 6. Способ по п.1, где вектор содержит третий маркер, который дает возможность проведения негативной селекции штаммов с элиминированным указанным вектором. ! 7. Способ по п.1, где вектор элиминируется в результате переваривания эндонуклеазами. ! 8. Способ по п.7, где вектор несет последовательности ДНК, которые распознаются рестрикционными эндонуклеазами и которые вместе с тем отсутствуют в геноме используемого штамма Clostridium. ! 9. Способ по п.7 или 8, где используемый штамм Clostridium несет в своем геноме |
