象草耐盐体细胞突变体的离体筛选方法

摘要

本发明涉及象草耐盐体细胞突变体的离体筛选方法，属于农业生物技术领域。将颗粒状愈伤组织转入添加16g/L NaCl的继代培养基，45d后转入添加相同NaCl浓度的分化培养基，35d后幼苗转入无NaCl的生根培养基，获得再生植株。当代再生植株在滩涂大田综合农艺性状评价和产草量测定后进行盆栽耐盐鉴定，获得了在pH 8.67-9.01的滩涂大田鲜草产量比对照高23.8％的植株；其无性系后代在含8.25g/L海盐的1/2 Hoagland营养液中，第1、2次刈割的鲜草生长量分别比对照高9.2％和7.4％；选择出综合农艺性状优良、耐盐性明显提高的耐盐体细胞突变体。本发明的优点是：操作简便，周期短，选择效率高。

主权项

象草耐盐体细胞突变体的离体筛选方法，其特征在于，1)材料选用象草的幼穗为外植体，以幼穗诱导产生的白色或浅黄色颗粒状愈伤组织为供体材料；2)培养基基本培养基：MS无机盐、B5有机成分，蔗糖质量比3％，琼脂条质量比0.8％；愈伤组织诱导培养基：附加2，4-D 4.0mg/L和KT 0.05mg/L或0.1mg/L；愈伤组织继代培养基：附加2，4-D 3.0mg/L和6-BA0.2mg/L；愈伤组织分化培养基：附加CPPU 2.0mg/L和NAA 0.01mg/L；或附加KT 0.5mg/L和NAA 0.5mg/L；幼苗生根培养基：1/2MS培养基，附加NAA 0.5mg/L；培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；3)颗粒状胚性愈伤组织的获得用黑塑料薄膜对象草进行短日照处理3～4周后，以处于孕穗初期的穗长小于5cm幼穗为外植体，把幼穗的切段消毒后接种于愈伤组织诱导培养基上，28d后获得白色或浅黄色、干燥、颗粒状愈伤组织；4)耐盐体细胞突变体的离体筛选将诱导培养基中培养28d的颗粒状愈伤组织转入添加16g/L NaCl的愈伤组织继代培养基，45d后转入添加NaCl相同浓度的愈伤组织分化培养基，培养35d后，超过3片叶的幼苗转入无NaCl的生根培养基，绿芽点转入含NaCl相同浓度的愈伤组织分化培养基，幼苗生长28d后移入简易大棚；培养室温度为26℃～28℃，光强为2000lux，每天光照16h；5)体细胞突变体综合农艺性状评价和耐盐鉴定体细胞耐盐胁迫离体培养再生的植株在滩涂大田综合农艺性状评价和产草量测定后，刈割留茬20cm，连部分根挖起植株，以有效分蘖单茎扦插无性繁殖，进行0、8.25g/L和16.5g/L海盐的1/2Hoagland营养液盆栽耐盐鉴定，选择出综合农艺性状优良、能在含16.5g/L海盐的1/2Hoagland营养液中生长、在含8.25g/L海盐的1/2Hoagland培养液生长明显优于对照的耐盐体细胞突变体植株，获得了象草耐盐新种质。