杜香属植物菌根试管内直接诱导、菌根化苗的快繁方法

摘要

本发明涉及一种植物组织培养技术，即一种杜香属植物菌根试管内直接诱导、菌根化苗的快繁方法。其步骤如下：(1)培养基DR+KT0.05mg·L-1+IAA 0.18mg·L-1+GA32.90mg·L-1，对杜香试管苗直接诱导菌根效果最好，速度快且诱导率高，植株生长势旺且根和苗的形态、发育均接近于野生植株。(2)菌根真菌的分离。(3)菌根真菌的回接。(4)菌根化植株的快繁。诱导率为94.7％以上。本方法简捷，经济实用，可操作性强，达到了快繁的目标，可用于含菌根的杜香苗的工厂化育苗，且均在试管内进行。杜香菌根诱导技术的研究成功，可为长白山区野生资源的开发利用和中药质量标准化提供技术保障。

主权项

一种杜香属植物菌根试管内直接诱导、菌根化苗的快繁方法，其特征在于步骤如下：(1)以杜香靠近根部新萌发的嫩芽为外植体，对外植体进行处理，菌根直接诱导培养基为：DR+KT0.05mg·L‑1+IAA 0.18mg·L‑1+GA32.90mg·L‑1；添加蔗糖15.0g·L‑1，琼脂粉7.8g·L‑1，调节pH值为5.6，在温度23℃±2℃，光照强度1100lx条件下培养，光照周期12h·d‑1；(2)菌根真菌的分离：在超净工作台上将已诱导成功的菌根化苗连同菌根提出，用枪形镊子和手术刀将植株的根和苗分离后，将根转接到马丁‑孟加拉红培养基中进行菌株分离培养；然后置于24±2℃培养箱中黑暗培养2～4w，观察菌丝萌发情况，待菌落从根中长出后，利用光学显微镜在100‑400倍下观察菌丝体形态和孢子形状；若菌落形态有差异，进行二次分离直至菌落形态一致性和均匀性；(3)菌根真菌的回接：培养一批不含有菌根的杜香试管苗，在超净工作台上用长剪将浮在培养基表面的根剪掉一部分后，再用接种针挑取已分离的菌丝粘在杜香根的切面，置22±2℃的培养室中培养；60d后统计菌根真菌侵染情况。(4)菌根化植株的快繁：将含有菌根的试管苗于根上部留1～2叶切下，并将切下的小枝条再切割成一叶一段转接到优化后的菌根诱导培养DR+KT0.05mg·L‑1+IAA 0.18mg·L‑1+GA32.90mg·L‑1中进行同时腋芽萌发、生长及菌根再生培养；55d为1个继代增殖周期，每瓶增殖倍数平均达60以上。