生产布尼亚病毒复制子颗粒的方法

摘要

本发明涉及一种生产有感染性的布尼亚病毒复制子颗粒的方法。这些布尼亚病毒复制子颗粒是安全的且能够在生物安全防护装置外使用。本发明进一步涉及重组的布尼亚病毒复制子颗粒以及这些重组的布尼亚病毒复制子颗粒的应用。

主权项

一种用于产生重组布尼亚病毒复制子颗粒的方法，所述方法包括：A)将生长培养基提供给真核细胞；B1)将T7聚合酶提供给所述真核细胞；B2)将布尼亚病毒(NSm)GnGc蛋白提供给所述真核细胞；B3)将对布尼亚病毒L基因组片段进行编码的载体提供给所述真核细胞，所述布尼亚病毒L基因组片段侧翼有T7启动子和核酶序列的cDNA；B4)将对布尼亚病毒S基因组片段的至少一部分进行编码的载体提供给所述真核细胞，所述布尼亚病毒S基因组片段包括N基因和3’UTR和5’UTR，且侧翼有T7启动子和核酶序列的cDNA；以及，可选的B5)将包括布尼亚病毒M基因组片段的载体提供给所述真核细胞，从所述布尼亚病毒M基因组片段，GnGc编码区已经功能性失活，该基因组片段的cDNA侧翼有T7启动子和核酶的cDNA；C)产生能够从所述生长培养基中分离出来的重组布尼亚病毒复制子颗粒；其中，步骤B1、B2、B3、B4、B5的顺序是任意的，这些步骤中的部分或者全部可以同时进行。