一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法

摘要

本发明公开了一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法，它包括：S1.样品处理：百日咳杆菌培养结束后去除菌体、收集上清液，上清液用超滤膜包浓缩；S2.一次层析：包括洗脱杂蛋白、分离百日咳毒素和分离纯化丝状血凝素；S3.二次层析：将分离的百日咳毒素粗制品上样于CaptoMMC层析柱，缓冲液洗脱，收集OD₂₈₀洗脱峰处的洗脱液，即为纯化的百日咳毒素。本发明采用CaptoSPImpRes层析柱、CaptoMMC层析柱对百日咳杆菌培养液的上清液进行分离纯化，可精确得到PT和FHA，质量可控，分离纯化百日咳抗原蛋白的纯度达95%以上，该方法具有操作简单、纯化速度快、成本低的优点。

主权项

一种分离纯化百日咳毒素和丝状血凝素的方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1. 样品处理：百日咳杆菌培养结束后将培养液立即降温至2～8℃，去除菌体、收集上清液，上清液用截留分子量为10KD的超滤膜包浓缩至原体积的1/12～1/8，调节浓缩液的pH至6.0；S2. 一次层析S21.洗脱杂蛋白：将上述浓缩液上样于平衡好的Capto SP ImpRes层析柱，用pH6.0、20mM PB、2M尿素、0.11M NaCl缓冲液洗脱杂蛋白；S22.分离百日咳毒素：再用pH6.0、20mM PB、2M尿素、0.17M NaCl的缓冲液进行洗脱，收集OD₂₈₀洗脱峰处的洗脱液，即为百日咳毒素粗制品；S23：分离纯化丝状血凝素：然后用pH6.0、20mM PB、2M尿素、0.35M NaCl的缓冲液进行洗脱，收集OD₂₈₀下洗脱峰处的洗脱液，即为纯化的丝状血凝素；S3. 二次层析：将步骤S22所得的百日咳毒素粗制品上样于平衡好的Capto MMC层析柱，用pH8.0、20mM PB、1M NaCl的缓冲液进行洗脱，收集OD₂₈₀洗脱峰处的洗脱液，即为纯化的百日咳毒素。