一种鳄鱼血去蛋白提取物及其提取方法和应用

摘要

本发明公开了鳄鱼血去蛋白提取物及其提取方法和应用，采血及预处理—与水混合后匀浆—灭活血中原有的酶—离心除杂—调节温度、pH值—加入蛋白酶进行水解—灭活—活性炭脱色、离心取上清—过滤、超滤—真空冷冻干燥—即得鳄鱼血去蛋白提取物。该提取物经除去大分子蛋白后，临床拟用给药途径为静脉注射或静脉点滴，有助于人体对其中丰富的氨基酸及小分子多肽的吸收和利用；该去蛋白方法天然、简便、能耗低、节约成本；经KM小鼠尾静脉注射该提取物进行急性毒性试验表明，其毒性极低，安全范围较大。

主权项

一种鳄鱼血去蛋白提取物，其特征在于通过以下步骤取得：(1)采集血液：通过断头采血的方式，采集泰国暹罗鳄鱼的新鲜血液，室温静置待其凝固；(2)匀浆：取凝血块，按重量比为1:5的比例加入注射用水稀释，再用匀浆机以13000r/min的速度充分匀浆；(3)超声波粉碎：取匀浆液于冰浴下用超声波粉碎机进行粉碎，25KHz，一共5次，每次处理15min，冷却15min后再进行处理；(4)热水浴灭原酶：匀浆液于90℃水浴15min，冷却；(5)离心除杂：将匀浆液在4℃以12000r/min离心1h，除去大分子蛋白、脂肪及血细胞碎片杂质，得匀浆上清液；(6)双酶水解：匀浆上清液中加入0.5％(g/mL)碱性蛋白酶、0.7％(g/mL)胰蛋白酶和0.1％(g/mL)氯化钙，于50℃‑60℃、pH为7.5‑8.5的条件下水解2‑4h；(7)灭活：所得酶解液在90℃下水浴15min灭活，冷却；(8)活性炭脱色：用磁力搅拌器于4℃下搅拌，10％(g/mL)活性炭脱色20min，在4℃以12000r/min离心15min得酶解上清液；(9)过滤膜：取酶解上清液分别在0.46μm、0.22μm微孔滤膜下过滤，得滤液；(10)超滤：将上述滤液经300KDa、100KDa、30KDa、10KDa、1KDa超滤膜下逐级超滤，得超滤液；(11)真空冷冻干燥：超滤液在‑40℃下预冻4h，用冻干机于‑40℃下真空冷冻干燥3d，即得鳄鱼血去蛋白提取物。