基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒

摘要

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒。本发明要解决的技术问题是为人呼吸道合胞病毒的检测提供一种新选择。本发明的技术方案是基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒，包括RSV参考品，RSV多克隆抗体，金纳米粒子酶标RSV抗体复合物；所述的RSV参考品为RSV病毒抗原，抗原浓度为60～80pg/mL；所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物为以金纳米粒子作为载体的辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体，抗体浓度为0.83～1.67μg/mL。本发明为RSV的检测提供一种新的选择。

主权项

基于纳米金信号放大的人呼吸道合胞病毒检测试剂盒，其特征在于：包括RSV参考品，RSV多克隆抗体，金纳米粒子酶标RSV抗体复合物；所述的RSV参考品为RSV病毒抗原，抗原浓度为60～80pg/mL；所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物为以金纳米粒子作为载体的辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体，抗体浓度为0.83～1.67μg/mL；所述试剂盒还包括洗涤液、稀释液、封闭液、显色液、终止液；所述的显色液是含有四甲基联苯胺和过氧化氢的柠檬酸缓冲液，pH4～5，四甲基联苯胺的浓度为0.095～0.15mg/mL，过氧化氢的浓度为0.63～0.66mmol/L；所述的金纳米粒子酶标RSV抗体复合物的制备方法包括如下步骤：a、13～15nm金纳米粒子的合成：超纯水中加入氯金酸，搅拌加热至沸腾，迅速加入柠檬酸三钠溶液，继续搅拌加热回流20～30min，待溶液颜色稳定，形成酒红色停止加热，继续搅拌冷却至室温，0.22～0.45μm滤膜过滤，0～4℃保存备用，所得金纳米粒子粒径为13～15nm；其中超纯水与氯金酸的体积比为97～99︰3.9～4.1，其中氯金酸的质量浓度为1％，超纯水与柠檬酸三钠的体积比为97～99︰11～11.6，柠檬酸三钠溶液的质量浓度为1％；b、金胶酶标抗体偶联：步骤a制备的13nm金纳米粒子溶液与辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体，混合均匀，室温孵育15～30min，再向其中加入与前述混合液等体积的封闭液，室温继续孵育15～30min，14000～16000rpm，离心12～20min，去除上清液，稀释液重悬沉淀并洗涤一次，最后用稀释液重悬至浓度为0.83～1.67μg/mL；其中，金纳米粒子溶液与辣根过氧化物酶标记的RSV多克隆抗体的体积比为19～21︰0.8～2。