药物临床前心脏风险评估方法

摘要

本发明提供了一种药物临床前心脏风险评估方法，包括以下步骤：动作电位频率设计、动作电位记录以及hERG通道手动膜片钳记录。本发明利用频率依赖性、动作电位三角化以及hERG阻断动力学来评估药物心率失常的风险，大大提高了药物的筛选效率和准确性，降低药物临床心率失常的假阳性。

主权项

药物临床前心脏风险评估方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）动作电位频率设计：用三组不同刺激频率包含100个脉冲来刺激浦肯野纤维在不同刺激频率下发动的动作电位，三组刺激频率周期分别为2000ms、1000ms和600ms；（2）动作电位记录：将兔子浦肯野纤维放置在灌流浴槽中，按4 mL/min的速度灌流台氏液，通过细胞内微电极记录细胞内膜电压，微电极的材质为硼硅酸盐玻璃毛细管，通过电极拉制仪拉制，微电极内充3 M KCl的内液；通过银丝连接到细胞内的静电计放大器记录胞内电压；待电压稳定后将药物按照浓度梯度灌流浦肯野纤维，并用步骤（1）的三组刺激频率分别刺激浦肯野纤维记录药物的作用；（3）hERG通道手动膜片钳记录：将hERG稳转细胞接种于玻片上，细胞密度低于50%，过夜培养后移到嵌于倒置显微镜平台的浴槽中灌流细胞外液，灌流速度为2.7 mL/min；GO封接细胞后将细胞膜电位钳制在‑80 mV，对细胞持续2 s、+20 mV电压刺激，激活hERG钾通道，再复极化至‑50 mV、持续5 s，产生尾电流；采用膜片钳放大器和采集系统记录膜电流；待电流稳定即5 min内电流衰减小于5 %，且尾电流不低于300 pA时，以相同的速度灌流含药物的细胞外液，记录药物在细胞除极通道开发时间段阻断hERG通道的动态过程。