用于DNA单链与蛋白质分子检测的电化学传感器的构建方法

摘要

本发明涉及一种用于DNA单链与蛋白质分子检测的电化学传感器的构建方法，通过在传统的DNA电化学传感器设计基础上，通过引入一个独特的附加DNA探针，起到了DNA单链检测的信号增强效应，并可以进一步应用到基于核酸适体的蛋白质电化学传感器中。本发明可以解决传统的用于DNA单链与特异蛋白质分子检测的电化学传感器件所固有的检测灵敏度低、前处理过程繁琐、检测底限浓度高的缺点，在DNA电化学传感器领域中具有很好的推广价值。

主权项

一种用于蛋白质分子检测的电化学传感器的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：取直径为2.0毫米的金盘电极一支，先后用粒径大小分别为1.0毫米、0.3毫米、0.05毫米的三氧化二铝粉体打磨抛光，随后将金盘电极依次在二次水、乙醇、丙酮中超声清洗多次；清洗后的金盘电极先后放入0.5M氢氧化钠溶液、0.5M硫酸溶液中进行电化学循环扫描后，用二次水清洗多次，随后将金盘电极用高纯氮气吹干；处理后的金盘电极在pH 7.4浓度为200mM的Tris‑HCl缓冲溶液中与0.5μM的捕获探针和5.0μM的三(2‑羰基乙基)磷盐酸盐进行反应，反应温度为37℃，持续时间为16小时，其中捕获探针为凝血酶的核酸适体序列：5′‑HS‑(CH₂)₆–AGA CAA GGA AAA TCC TTC CCC CCC CGG TTG GTG TGG TTG G‑3′；在同样的缓冲溶液和反应条件下，将金盘电极进一步与0.5μM的附加探针反应，附加探针的DNA序列为：5′‑GGT TGG TGT GGT TGG‑(CH₂)₃‑SH‑3′；将捕获探针和附加探针共同修饰的金盘电极用Tris‑HCl缓冲溶液清洗后，进一步在pH7.4的10mM的Tris‑HCl缓冲溶液中与6‑巯基乙醇反应，温度为30℃，反应时间为2小时；随后用二次水清洗，将金盘电极与0.5μM的报告探针在杂交缓冲溶液中反应，所述杂交缓冲液含50mM Tris‑HCl、100mM氯化钠及质量浓度为0.1％的吐温20，pH 7.4，温度为40℃，反应时间为4小时，其中报告探针的DNA序列为：5′‑(CH₂)₆‑MB‑CCA ACC ACA CCA ACC CCC CCC CCT TGA AGG ATT TTC CTT GTC T‑3′；修饰后的金盘电极用Tris‑HCl清洗多次，从而得到电化学传感器。