一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记

摘要

本发明为一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记开发，属生物技术领域。本发明针对传统的水稻Pita基因凝胶电泳的检测方法，提出一种利用DNA熔解温度分析水稻Pita基因的功能标记。本发明根据水稻等位基因Pita与pita在编码区第918氨基酸的G/T变异（Pita为G，pita为T），设计功能标记Pita-G/T。利用该标记进行两轮PCR扩增，第一轮PCR以基因组DNA为模板，利用Pita-G/T-out引物扩增；第二轮PCR以稀释的第一轮PCR扩增产物为模板，利用Pita-G/T-in引物扩增。利用仪器检测第二轮PCR扩增产物DNA熔解温度，通过熔解温度高低区分Pita和pita序列差异，从而判别水稻材料的稻瘟病抗性。

主权项

一种区分稻瘟病抗性基因Pita与稻瘟病感病基因pita的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 以待测基因组DNA为模版，利用Pita‑G/T‑out扩增；S2. 将步骤S1扩增所得的基因组稀释，并以之为模版，利用Pita‑G/T‑in扩增；S3. 利用仪器检测步骤S2扩增所获的DNA的熔解温度，如果待测DNA的熔解温度在78.8~79.3℃之间，待测水稻为抗稻瘟病水稻，如果待测DNA的熔解温度在77.8~78.3℃之间，待测水稻为感稻瘟病水稻；  其中， Pita‑G/T‑out：正向引物序列为SEQ ID NO:1；反向引物序列为SEQ ID NO:2，Pita‑G/T‑in：正向引物序列为SEQ ID NO:3；反向引物序列为SEQ ID NO:4；步骤S2所述的稀释为稀释15‑25倍。