一种硼酸介导的聚合酶链反应检测DNA中5-羟甲基胞嘧啶的方法和试剂盒

摘要

本发明一种硼酸介导的聚合酶链反应检测DNA中5-羟甲基胞嘧啶的方法和试剂盒。本发明结合葡萄糖基化反应，利用硼酸及其衍生物试剂可与葡萄糖基化5-羟甲基胞嘧啶中的邻二醇发生的共价作用，显著增加被复制碱基单元的体积，有效抑制聚合酶扩增反应的特点，提出硼酸介导的DNA聚合酶链扩增反应，可特异性地识别特定基因/片段中的5-羟甲基胞嘧啶。在此基础上，发展了一种快速、灵敏测定5-羟甲基胞嘧啶的试剂盒，可应用于各种细胞分析；与传统的检测试剂盒相比，该方法不受酶切位点限制，可适用于各种序列中5-羟甲基胞嘧啶的分析鉴定。本试剂盒具有广阔的应用前景，对于进一步阐明5-羟甲基胞嘧啶的生物学功能具有十分重要的意义。

主权项

一种聚合酶链反应方法和一种试剂盒，可准确检测DNA中5‑羟甲基胞嘧啶，其特征在于：1）DNA片段中的5‑羟甲基胞嘧啶可被葡萄糖基化；2）非5‑羟甲基胞嘧啶的DNA碱基不能被葡萄糖基化；3）硼酸类化合物可与葡萄糖基化5‑羟甲基胞嘧啶中的顺式邻二醇发生共价作用，并通过这种作用显著抑制含葡萄糖基化5‑羟甲基胞嘧啶DNA片段的复制与扩增；4）DNA的复制与扩增是通过聚合酶链反应；5）如果DNA不含5‑羟甲基胞嘧啶，其复制与扩增则不受硼酸类化合物的影响；6）含5‑羟甲基胞嘧啶DNA与不含5‑羟甲基胞嘧啶DNA的检测分析。