用于扩增、定量和鉴定核酸的方法

摘要

本发明涉及从核酸分子库中扩增以及任选地定量和/或鉴定多种选定核酸分子的改进方法。使用第一轮多重扩增，其中允许扩增反应进行到扩增子之间对反应组分发生显著竞争之前的点。其后是第二轮扩增，其通常包含荧光报告子以允许定量每种选定的核酸序列。所述方法可用于从多种来源(如基因表达产物)中扩增和定量核酸，由此，可以从很有限的样品中和从已降解的存档样品中扩增和定量许多这样的产物。

主权项

从核酸分子库中扩增多种选定的核酸分子的方法，其包括：(a)在第一轮多重反应中扩增多种选定的核酸分子，所述反应包含多种外部引物对，每对引物对一种选定核酸序列具有特异性并且在所述反应中过量存在，其中允许所述反应进行到扩增子之间对反应组分发生显著竞争之前的点；(b)稀释从所述第一轮多重反应进入多个第二轮扩增反应的所述扩增子和残余反应组分，每个所述第二轮扩增反应均包含至少一对内部引物，每对引物对一种所述选定核酸序列具有特异性，其中所述稀释为25倍稀释，使得第二轮扩增中的进一步引发基本上由所述内部引物指导，由此基本上只扩增由所述内部引物所引发的所述选定核酸序列；和(c)在所述多个第二轮扩增反应中进一步扩增所述选定的核酸分子，使得每个第二轮反应由所述内部引物分别进一步扩增所述多种选定核酸分子中的亚组。