Sirt1-Nrf2新抗氧化通路在氧化损伤治疗中应用的实验方法

摘要

本发明公开了一种Sirt1-Nrf2新抗氧化通路在氧化损伤治疗中应用的实验方法，包括体外实验和体内试验，体外实验结果显示氧化应激状态下，Nrf2蛋白稳定性、蛋白表达量下降，乙酰化水平增高；氧化应激状态下，Sirt1蛋白和基因表达水平均显著下降。体内实验结果显示氧化损伤情况下，Nrf2和Sirt1表达均明显下降；Sirt1激活剂能够上调Nrf2水平，增加机体抗氧化分子表达，并减低氧化性肺损伤；上调Sirt1基因表达能够增加机体抗氧化分子表达，减低氧化性肺损伤。

主权项

一种Sirt1‑Nrf2新抗氧化通路在氧化损伤治疗中应用的实验方法，其特征在于，所述的Sirt1‑Nrf2新抗氧化通路在氧化损伤治疗中应用的实验方法包括体外实验和体内试验；所述的体外实验包括：步骤一、小鼠AEC‑II的分离纯化；步骤二、小鼠肺泡II型上皮细胞的鉴定；步骤三、RT‑PCR检测PQ暴露小鼠AEC‑II中Sirt1、Nrf2基因表达改变与PQ作用的时间、剂量效应关系；步骤四、Western‑bolt法检测PQ暴露小鼠AEC‑II中Sirt1、Nrf2蛋白表达改变与PQ作用的时间、剂量效应关系；步骤五、免疫沉淀法检测PQ暴露小鼠AEC‑IINrf2的乙酰化水平；步骤六、化学比色法检测SOD、CAT、GSH、MDA；步骤七、ELISA检测HO‑1表达；步骤八、CO‑IP法检测Sirt1与Nrf2蛋白之间的相互作用；所述的体内实验包括：步骤一、小鼠原代MSC提取与培养；步骤二、BMSC的免疫荧光鉴定；步骤三、慢病毒转染BMSC细胞；步骤四、PQ中毒小鼠实验分组及模型建立；步骤五、PRC法、Western‑blot法检测Nrf2、Sirt1蛋白的表达情况；步骤六、化学比色法检测MDA、SOD、GSH、CAT改变；步骤七、ELISA法检测IL‑1β、TNF‑α、IL‑10、TGF‑β1蛋白含量；步骤八、肺组织损伤的检测。