用化学修饰的引物相比于DNA优先扩增mRNA

摘要

本发明涉及用包含至少一个在环外氨基处被修饰的核苷酸的寡核苷酸而对包含外显子-外显子接头的信使RNA目标进行选择性扩增的方法、寡核苷酸、反应混合物和试剂盒。

主权项

一种在存在相应的基因组DNA污染物的情况下选择性扩增信使RNA目标的方法，包括步骤：a). 提供包含所述mRNA目标和所述相应的基因组DNA污染物的样品，b). 将第一寡核苷酸与所述mRNA目标杂交，用至少一种能够RNA‑引导合成的酶进行RNA‑引导的DNA合成，其中所述第一寡核苷酸：     i. 在所述第一寡核苷酸的3’末端包含一个或两个具有在环外氨基处用苄基或取代的苄基共价修饰的腺嘌呤、鸟嘌呤或胞嘧啶碱基的核苷酸，     ii. 与所述mRNA目标且与所述相应的基因组DNA污染物至少部分互补，和     iii. 在目标中横跨外显子‑外显子接头；c). 用所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸以及至少一种能够DNA‑引导的DNA合成的酶扩增步骤 b）的产物；其中所述第二寡核苷酸与所述mRNA目标至少部分互补；其中当与采用未修饰的第一寡核苷酸的扩增比较时，相比于所述相应的基因组DNA污染物选择性地扩增所述mRNA目标。