一种玉米粗缩病种质抗性的快速检测鉴定方法

摘要

本发明公开了一种玉米粗缩病种质抗性的快速检测鉴定方法，该方法步骤如下：1）利用RBSDV病毒S7片段的重组质粒DNA作为标准品，稀释后对获得的梯度标准品进行荧光定量RT-PCR扩增，以各梯度浓度标准品的模板拷贝数的对数值为横坐标值、Ct值为纵坐标值绘制出标准曲线；2）在玉米苗期周期时间点采集待测玉米品种特定位置叶片并提取RNA；3）对提取的RNA进行荧光定量RT-PCR检测获得不同时间样品的Ct值，再利用标准曲线计算出病毒拷贝数，即可获得该玉米品种体内RBSDV病毒积累动态曲线图，从而确定抗感性。本发明能够在玉米苗期从分子水平上确定其抗感性，鉴定周期短且可靠性高，具有较大的育种应用价值。

主权项

一种玉米粗缩病种质抗性的快速检测鉴定方法，其特征在于：该快速检测鉴定方法包括以下步骤：1）荧光定量PCR反应获取RBSDV病毒含量标准曲线：利用RBSDV病毒S7片段的重组质粒DNA作为标准品，经10倍稀释后对获得的梯度标准品进行荧光定量RT‑PCR扩增，以各梯度浓度标准品的模板拷贝数的对数值为横坐标值、以各梯度浓度标准品测得的Ct值为纵坐标值，绘制出标准曲线；2）玉米样品RNA获取：在玉米苗期周期时间点采集待测玉米品种特定位置叶片并提取RNA；3）玉米样品病毒拷贝数获取及抗性鉴定：对步骤2）中提取的RNA进行荧光定量RT‑PCR检测获得不同时间样品的Ct值，再利用步骤1）中的标准曲线计算出相应的病毒拷贝数，以取样时间点为横坐标值、与取样时间点相对应的病毒拷贝数的对数值为纵坐标值，即可获得该玉米品种体内RBSDV病毒积累动态曲线图，从而快速确定该玉米品种的玉米粗缩病种质抗性。