一种高产丁醇的基因工程菌株及其应用

摘要

本发明公开了一种高产丁醇的基因工程菌株，它是在拜氏梭菌中插入失活编码NADH-辅酶Q氧化还原酶关键亚基的基因Cbei_4110，从而得到基因Cbei_4110失活的重组菌株。本发明还公开了上述基因工程菌株的构建方法和应用。本发明的基因工程菌株，以葡萄糖为碳源时，在2L发酵罐中总溶剂产量和丁醇产量分别达到了12.7g/L和9.9g/L，分别比出发菌提高了17.5%和25.3%，丁醇比高达78%，糖转化率高达0.42，利用本发明方法构建的重组菌株，能提高丁醇产量和糖转化效率，降低生产成本。

主权项

一种高产丁醇的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)构建Cbei_4110基因的插入失活重组载体；(2)将步骤(1)得到的重组载体转化入拜氏梭菌中，获得Cbei_4110基因插入失活的重组菌株；所述的拜氏梭菌为拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)NCIMB 8052；所述的基因Cbei_4110，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示；步骤(1)中，以含有二型内含子的大肠杆菌‑拜氏梭菌穿梭载体pWJ为出发载体，在pWJ质粒的Xho Ⅰ和BsrG Ⅰ酶切位点处插入SEQ ID NO：2所示的序列构建得到Cbei_4110基因的插入失活载体pWJ‑392，所述载体pWJ的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。