超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法

摘要

本发明公开了超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法，所述的9种脂溶性维生素分别为：维生素A、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素；采用超高效液相色谱仪检测经过预处理的血清中的上述9种脂溶性维生素，通过样品的响应值的大小与标准品的比较计算上述9种脂溶性维生素的含量。本发明方法的优势是：节省样品，200微升样品，可以实现九种脂溶性维生素分析；节约时间，将最佳吸收波长不同的九种目标组分整合在一个方案中在12.5分钟内可以完成分离分析；节约成本，避免大量有机试剂消耗及仪器损耗。

主权项

超高效液相色谱技术测定血清中9种脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述的9种脂溶性维生素分别为：维生素A、α‑生育酚、γ‑生育酚、δ‑生育酚、α‑胡萝卜素、β‑胡萝卜素、辅酶Q10、番茄红素和叶黄素；采用超高效液相色谱仪检测经过预处理的血清中的上述9种脂溶性维生素，通过样品的响应值的大小与标准品的比较计算上述9种脂溶性维生素的含量，具体色谱条件为：(1)色谱柱型号：BEH C18 1.7μm*2.1μm*50mm；(2)流动相：流动相A：0.1％v/v三氟乙酸水溶液；流动相B：乙醇；流动相C：0.1％v/v三氟乙酸甲醇溶液；流动相梯度见表1，流动相按照表1中的梯度保留时间均匀变化；表1 流动相梯度洗脱参数(3)流速：初始流速0.2mL/min，匀速提升至4.51分钟时升到0.3mL/min，8.51分钟再匀速下降，至8.6分钟时降至0.2mL/min；(4)柱温：30℃；(5)采用可调紫外可见光检测器，进行多波长切换，具体波长切换条件见表2；表2 波长切换参数(6)进样量：1μL；其中，所述的经过预处理的血清按照如下方法制备得到：取200μL血清加入1.5mL离心管中，向其中加入200μL冷冻乙醇涡漩2min，加入800μL冷冻的0.4g/L 2，6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚的正己烷溶液，1500rpm涡漩10min，3000rpm离心20min，取出上清液，离心后的沉淀部分加入800μL冷冻的0.4g/L 2，6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚的正己烷溶液，1500rpm涡漩10min，3000rpm离心20min，合并上清液，氮气流上吹至近干，然后用100μL冷冻乙醇复溶涡旋60s，过0.2μm滤膜。