一种小鼠肉瘤180多药耐药细胞株的体内构建方法

摘要

本发明提供一种小鼠肉瘤180多药耐药细胞株的体内构建方法，属于生物医学技术领域。选用顺铂、氟尿嘧啶和环磷酰胺三种药物体内给药并逐渐增加剂量诱导S180腹水瘤小鼠，成功构建了S180多药耐药细胞株，对阿霉素具有交叉耐药性，耐药强度较高，耐药稳定时间较长。本发明为研究肿瘤多药耐药机制、筛选各类抗肿瘤药物、研发包括中药或天然药物类在内的肿瘤耐药逆转药物提供了小鼠肿瘤多药耐药细胞株与动物模型，具有很好的应用前景。

主权项

一种小鼠肉瘤180多药耐药细胞株的体内构建方法，其特征是包括以下步骤：(1)常规复苏冻存的小鼠肉瘤180(以下简称S180)细胞株，用含牛血清的1640培养液，于37℃、5％CO₂培养箱中常规体外培养、传代，以扩增细胞；取体外扩增的对数生长期的S180细胞悬液，调整细胞浓度为6‑8×10⁶/ml，取此细胞悬液0.15‑0.3ml接种于ICR小鼠腹腔内，建立S180腹水瘤小鼠模型；(2)常规饲养S180腹水瘤小鼠，待肉眼观察到S180腹水瘤小鼠腹部明显膨隆后2‑3天抽取腹水，用无菌生理盐水稀释，调整细胞浓度为4‑6×10⁶/ml，取此细胞悬液0.15‑0.3ml接种于ICR小鼠腹腔内，反复重复步骤(2)进行反复传代，建立稳定生长的S180腹水瘤小鼠模型；(3)取稳定生长的S180腹水瘤小鼠，待肉眼观察到稳定生长的S180腹水瘤小鼠腹部明显膨隆后2‑3天抽取腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度为1‑3×10⁶/mL，取此细胞悬液0.15‑0.3mL注入ICR小鼠腹腔内进行传代，传代18‑24小时后给予DDP(顺铂)、FU(氟尿嘧啶)和CPA(环磷酰胺)3种药物；其中，DDP、ip每周一次；FU、ig每天一次；CPA、ig每天一次；3种药物的剂量按小、中、大递增的方法连续给药，小剂量为在每1kg的ICR小鼠中含DDP、FU、CPA分别为3mg、3mg、3mg，给药时间为第1代和第2代；中剂量为在每1kg的ICR小鼠中含DDP、FU、CPA分别为4mg、6mg、6mg，给药时间为第3代和第4代；大剂量为在1kg的ICR小鼠中含DDP、FU、CPA分别为5mg、12mg、12mg，给药时间为第5代和第6代；在6代的传代中，皆待肉眼看到ICR小鼠腹部明显膨隆后3‑5天抽取腹水，用无菌生理盐水调整细胞浓度为1‑3×10⁶/mL，取此细胞悬液0.15‑0.3mL注入ICR小鼠腹腔内进行下一代的传代，直至传到第6代看到ICR小鼠腹部明显膨隆后3‑5天抽取腹水，得到的第6代腹水瘤小鼠的腹水瘤细胞，即耐药强度较高、耐药稳定时间较长的小鼠肉瘤180多药耐药细胞株。