用于检测六价钼离子的酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法

摘要

本发明涉及一种用于检测六价钼离子的酶联免疫试剂盒及组建和检测方法。试剂盒内设有用六价钼离子包被抗原包被过的酶标板、抗六价钼离子单克隆抗体抗、酶标二抗、底物显色液、终止液、六价钼离子标准溶液、洗液浓缩液、样品处理液。检测前用0.1 moL/L的EDTA鳌合剂处理样品，使六价钼离子与EDTA充分鳌合，得到待检测样品溶液，然后进行检测。本发明试剂盒能检测痕量的六价钼离子，检测灵敏度为1 ng/mL；检测步骤少，节省时间，降低操作误差，检测成本不到理化分析方法的1/20；时效性强，可进行现场检测，具有快速、简便、敏感、特异、经济等特性，主要用于环境、土壤、水、食品中钼离子污染残留的大批量样品筛检。

主权项

一种用于检测六价钼离子的间接竞争酶联免疫试剂盒，包括盒体，其特征在于：盒体内设有用六价钼离子包被抗原包被过的酶标板、抗六价钼离子单克隆抗体、酶标二抗、底物显色液、终止液、六价钼离子标准溶液、洗液浓缩液、样品处理液；所述六价钼离子包被抗原是由以下方法制备的：取20 mL钼酸与1mL浓度为10 mmol/L pH值为8.0的HEPES缓冲液混合，得到Mo⁶⁺溶液；称取10 mg 异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸ITCBE溶于1mL 二甲基亚砜中，形成金属螯合剂溶液；将Mo⁶⁺溶液和金属螯合剂溶液混合，调节溶液的pH值至7.4，25℃搅拌24h，转速为1000 r/min，形成Mo⁶⁺‑ITCBE螯合物的半抗原母液；称取20 mg 载体蛋白OVA溶于1mL浓度为10 mmol/L、pH值为8.0的HEPES缓冲液中，形成载体蛋白溶液；取1mL Mo⁶⁺‑ITCBE螯合物半抗原母液，加入到1mL载体蛋白溶液中，调节pH值至9.0，室温下1000 r/min搅拌24 h，然后移入透析袋中透析7 d天，收集透析液，制备出包被抗原Mo⁶⁺‑ITCBE‑OVA，－20℃冻存备用；所述酶标板按如下方法进行包被：包被抗原为Mo⁶⁺‑ITCBE‑OVA，包被浓度为2 μg/mL，包被溶液为0.05 moL/L pH 9.6的碳酸盐缓冲液，包被剂量为100 μL/孔，37℃温育2 h或室温8 h，用洗液PBST洗涤3次，用5%的猪血清封闭，每孔250 µL，37℃温育1 h，用洗液PBST洗涤3次；所述洗液PBST为0.01 mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液，其中含0.05%的Tween‑20。