牙鲆F3代生长快纯系构建方法

摘要

一种选择、诱导和培育牙鲆优良纯系的育种技术方法，本技术属于海洋生物技术领域。主要方法包括：牙鲆F1代和F2代生长快优良家系的筛选和建立、F3代有丝分裂和减数分裂雌核发育纯系的诱导建立、牙鲆纯系的遗传检测。通过此方法筛选和构建了生长快F1代家系F0750，F2代生长快优良家系F09119。利用异源冷冻精子诱导，压力休克和冷休克诱导，分别建立了F3代有丝分裂雌核发育系F1346和减数雌核发育系F1324，并与近交系F1313进行生长比较，F1346生长速度明显高于F1324和F1313。利用微卫星标记scaffold288_1492对其进行遗传检测，F1346和F1324的基因型分别为纯合型AA和BB，F1313为杂合型。从此为生长快牙鲆新品种培育构建了优良纯系。

主权项

一种选择、诱导和培育牙鲆优良纯系的育种技术方法，主要技术特征包括：1)牙鲆F1代生长快家系的建立和筛选：利用牙鲆抗鳗弧菌病群体(RS)、日本牙鲆群体(JS)和黄海牙鲆群体(YS)进行人工定向交配，建立家系，通过对生长性状测量、方差分析、绝对增重率比较，筛选出生长快家系F0750；2)F2代生长快优良家系的建立和筛选：利用F0750、韩国牙鲆群体(KS)、日本牙鲆群体(JS)、牙鲆抗鳗弧菌病群体(RS)进行人工定向交配，建立家系，通过对生长性状测量、方差分析、绝对增重率比较，筛选出生长快家系F09119；3)F3代有丝分裂纯系的诱导建立：利用冷冻保存的鲈鱼精子，在40000μJ/cm²强度紫外线下照射，使其遗传物质失活，与F09119的卵进行授精，在水温17℃下，受精后58min，利用590kg/cm²静水压处理6min，诱导受精卵进行有丝分裂雌核发育，获得纯系F1346；4)F3代减数雌核发育纯系的诱导建立：用冷冻保存的鲈鱼精子，在40000μJ/cm²强度紫外线下照射，使其遗传物质失活，与F09119的卵进行授精，授精3min后浸入2‑4℃海水中冷休克处理45min，使其染色体加倍，然后将卵放入17℃海水孵化，获得牙鲆减数雌核发育系F1324；5)牙鲆纯系的遗传检测：利用牙鲆微卫星标记scaffold288_1492，对F1346、F1324和近交系F1313进行遗传检测，F1346和F1324基因型为纯合型AA和BB，F1313为杂合型，从而建立了生长快优良纯系。