一种耐高温碱性木聚糖酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种耐高温碱性木聚糖酶的制备方法，属于酶制剂制备技术领域。以产耐高温碱性木聚糖酶的嗜热芽孢杆菌（Bacillus thermophilus）701为出发菌株，并通过优化培养基组成和发酵工艺经液体深层发酵制备出一种耐高温、耐碱性强、作用条件宽泛、不具有纤维素酶活性的适合造纸、食品和饲料等领域的耐高温碱性木聚糖酶。酶比活力为350-420IU/ml；最适反应温度为65℃，适用温度范围为40-75℃；最适反应pH值为10.0，适用反应pH值范围为5.0-11.0。

主权项

一种耐高温碱性木聚糖酶的制备方法，其特征在于，所述木聚糖酶以产耐高温碱性木聚糖酶的嗜热芽孢杆菌（Bacillus thermophilus）CCTCC M 2013537为出发菌株，并通过优化培养基组成和发酵工艺经液体深层发酵制备，包括如下步骤：将保存完好的嗜热芽孢杆菌CCTCC M 2013537的斜面菌种经活化和一、二、三级种子培养及一级种子罐逐级扩大培养得到种子液，以6%接种量接入发酵罐，培养温度37‑45℃，搅拌速度200‑700rpm，通风量1:1‑3 V/V,培养时间10‑15h；然后以1‑2℃/h降温速率缓慢降温至10‑15℃，恒温培养15‑20h；继续以1‑2℃/h降温速率缓慢降温至2‑5℃，此时，将种子罐种子液以4%接种量追加接入发酵罐，恒温培养20‑30h；最后以1‑2℃/h升温速率缓慢升温至10‑15℃，恒温培养15‑20h；继续以1‑2℃/h升温速率缓慢升温至37‑45℃，恒温培养15‑20h；发酵液经过滤、浓缩、调配、精滤、干燥得耐高温碱性木聚糖酶， 所述调配过程加入浓缩酶液总重量0.5‑5%中草药剂粉；所述中草药剂粉的制备方法如下：以重量份数计，称取黄芪20‑30份，党参10‑18份，柴胡10‑15份，黄芩10‑15份；分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，然后于容器中均匀混合并添加3‑6倍重量的水，控制温度70℃～90℃保持2～4h，然后降温至45‑60℃，加入混合物料总重量5‑10%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5.5‑6.8，酶解2‑4h，最后添加混合物料0.5‑3倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比例为1：1‑1.5，控制温度至60℃～78℃保持3～4h，过滤；滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药剂粉；所述混合酶制剂的重量份数组成为：内β‑葡聚糖酶10‑20份，外β‑葡聚糖酶10‑20份，β‑葡萄糖苷酶10‑15份，木聚糖酶15‑20份，戊聚糖酶15‑20份，普鲁兰酶20‑30份，β‑淀粉酶10‑15份，中性蛋白酶10‑15份，酸性蛋白酶10‑15份，超氧化物歧化酶5‑10份，葡萄糖氧化酶5‑10份，酸性磷酸酶5‑10份。