一种基于金棒核-银卫星组装体对Mucin-1表面增强拉曼信号超灵敏检测的方法

摘要

一种基于金棒核-银卫星组装体对Mucin-1表面增强拉曼信号超灵敏检测的方法，属于分析化学技术领域。本发明通过金纳米棒的合成、银纳米粒子的合成、金纳米棒上修饰Mucin-1 适配体Mucin-1 aptamer，金纳米棒偶联拉曼信标分子4-ATP，银纳米粒子上修饰与适配体部分互补序列Mucin-1 CS，金棒核-银卫星结构的组装，表面增强拉曼光谱表征，建立拉曼信号与Mucin-1浓度的标准曲线等步骤实现。本发明制备出组装结构均一、可控并且具有表面增强拉曼光谱活性的金棒核-银卫星组装体，并将其应用于Mucin-1的检测，与传统检测方法相比成本低、灵敏度高、特异性好、方便快捷，具有很好的实际应用前景，是一种理想的Mucin-1超灵敏检测方法。

主权项

一种基于金棒核‑银卫星组装体对Mucin‑1表面增强拉曼信号超灵敏检测的方法，其特征在于：将修饰有Mucin‑1适配体Mucin‑1 aptamer的金纳米棒，和修饰有与适配体部分互补序列Mucin‑1 CS的银纳米粒子，组装得到金棒核‑银卫星组装体，当存在待测物Mucin‑1时，组装体的结构发生改变引起拉曼信号的变化，进而进行检测；具体步骤如下：（1）检测传感器的构建a、金纳米棒上修饰适配体Mucin‑1 aptamer：采用晶种生长法合成金纳米棒，将其离心浓缩10倍后，以0.5mM pH 7.2的Tris‑HNO₃缓冲液进行重悬；加入巯基化的适配体Mucin‑1 aptamer，使得适配体与金纳米棒的摩尔比为500︰1；室温孵育3h后，加入NaCl溶液至其浓度为20mM，之后每隔1h加一次NaCl，直至NaCl的终浓度为100mM；老化过夜后，离心3次除去溶液中未反应的适配体，以0.5 mM pH 7.2 的Tris‑HNO₃ 重悬，得到修饰适配体Mucin‑1 aptamer金纳米棒溶液，待用；Mucin‑1 aptamer：5’‑SH‑AAAAAGCAGT TGATCCTTTG GATACCCTGG T ‑3’ ；b、金纳米棒偶联拉曼信标分子：在步骤a制备的修饰适配体Mucin‑1 aptamer金纳米棒溶液中，加入信标分子4‑氨基苯硫酚4‑ATP保持其终浓度为10μM，室温孵育8h；c、银纳米粒子偶联Mucin‑1适配体部分互补序列Mucin‑1 CS；采用硼氢化钠还原硝酸银的方法合成粒径为10nm的银纳米粒子，银纳米粒子离心浓缩2倍后，用1mM pH7.2的Tris‑HNO₃ 重悬，加入巯基化部分互补序列Mucin‑1 CS，使得Mucin‑1 CS与银纳米粒子的摩尔比为5︰1；室温孵育过夜后，离心去除未反应的Mucin‑1 CS，用1mM pH7.2的Tris‑HNO₃重悬待用；Mucin‑1 CS：5’‑SH‑ AAAAAATCCA AAGGATGTTC TG ‑3’；d、金棒核‑银卫星结构的组装：取50μL修饰了Mucin‑1 aptamer的金纳米棒，与80μL修饰Mucin‑1适配体部分互补序列Mucin‑1 CS的银纳米粒子混匀杂交，并加入Mg（NO₃）₂至其浓度为20 mM进行老化，室温下孵育12 h，得到金棒核‑银卫星组装体；（2）表面增强拉曼光谱检测：建立金棒核‑银卫星组装体表面增强拉曼信号与Mucin‑1浓度的标准曲线，根据Mucin‑1浓度与拉曼信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用拉曼信号对Mucin‑1进行检测。