一种黄龙病菌DNA的快速提取方法

摘要

本发明公开了一种黄龙病菌DNA快速提取方法，包括从感染黄龙病的柑橘叶片、根部、长春花叶片中依次通过冷冻抽干、研磨、加入适量NaOH和石英沙再次研磨、高速离心、无水乙醇沉淀几个步骤将黄龙病菌的DNA分离。本发明简便、安全、快速、成本低廉，提取的DNA溶液可直接用做巢式PCR和定量PCR检测的模板，适用于感染黄龙病的柑橘叶片、根部、长春花叶片等各种组织中黄龙病菌DNA提取，同时本提取方法无需使用Tris饱和酚、氯仿等具有强腐蚀性试剂，可有效保证人身安全。

主权项

一种黄龙病菌 DNA 的快速提取方法，其特征在于：从感染黄龙病的柑橘叶片、根部、长春花叶片中依次通过冷冻抽干、研磨、加入适量 NaOH 和石英沙再次研磨、高速离心、无水乙醇沉淀几个步骤将黄龙病菌的DNA分离；包括以下步骤：（1） 取 0.4 g 叶片中脉或根部样品，剪碎后放入 1.5mL 离心管，冷冻抽干， 用研磨仪磨成粉末；（2）加入500 μL 0.5 M NaOH 及适量石英沙，放置摇床上 200转/分钟充分混匀 1 小时以上 ；（3） 沸水浴中放置30 s，取出后加入500 μL 0.5 M pH 8.0 的 Tris‑HCl，颠倒混匀数次12000 rpm 离心 10 min ；（4）取上清液，加入 2 倍体积无水乙醇和 1/10 体积 3 M pH 5.2 醋酸钠沉淀核酸，‑20 ℃放置 0.5 h以上 ；（5）12000 rpm 离心 10 min，弃上清 ；（6）加入70％的乙醇清洗沉淀，12000 rpm 离心 30 s，弃上清；（7）重复步骤（6）一次；（8）12000 rpm离心 2 min， 吸干后自然晾干，然后加入 30~50 μL TE bufer 或 ddH2O溶解，即可得到黄龙病菌DNA。