一种同时测定正品大黄中13个化学成分含量的HPLC方法

摘要

本发明提供一种HPLC-DAD法同时测定大黄中13个化学成分含量的方法，该方法包括样品提取和液相分离两个步骤：首先，取干燥的大黄药材粉末0.200g(60mesh)，精密称定，置10ml茶色容量瓶中，加入10ml甲醇，室温浸泡2h后超声30min，重复3次，合并提取液并过滤回收溶剂后用甲醇溶解并转移至25ml茶色容量瓶，定容并摇匀，作为供试品溶液；然后，进行高效液相色谱分析，色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(5μm，250mm×4.6mm，Agilent)；流动相：甲醇(A)-0.05％磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，流速：1.0ml/min，检测波长：280nm，232nm，柱温：30℃。本发明的方法经方法学验证准确可靠，可用于大黄药材的多指标成分的定量分析。

主权项

HPLC‑DAD法同时测定大黄中13个化学成分含量的方法，包括样品提取和液相分离两个步骤，其特征在于对大黄中的13个被测成分的充分提取和良好分离，采用Zorbax Eclipse XDB‑C18色谱柱分离，以甲醇‑0.05％磷酸水溶液为流动相作梯度洗脱；(1).标准溶液的配置分别称取13个对照品适量，精密称定，加甲醇制成(+)‑儿茶素0.596mg/ml，白黎芦醇4′‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷0.611mg/ml，(‑)‑表儿茶素‑3‑没食子酸酯0.360mg/ml，白黎芦醇4′‑O‑β‑D‑(6″‑O‑没食子酰)‑吡喃葡萄糖苷0.368mg/ml，莲花掌苷0.386mg/ml，番泻苷B 0.350mg/ml，6‑羟基酸模素‑8‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷0.607mg/ml，番泻苷A 0.388mg/ml，芦荟大黄素0.329mg/ml，大黄酸0.430mg/ml，大黄素0.290mg/ml，大黄酚0.390mg/ml，大黄素甲醚0.320mg/ml的混和对照品溶液作为储备液，密封4℃保存；(2).供试品溶液的制备大黄药材经干燥、粉碎后过60目筛，取药材粉末0.200g，精密称定，置10ml茶色容量瓶中，加入10ml甲醇，室温浸泡2h后超声30min，重复3次，合并提取液并过滤，回收溶剂后用甲醇溶解并转移至25mL茶色容量瓶，定容并摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过，HPLC分析；(3).液相色分离色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB‑C18，色谱柱长度250mm，内径4.6mm，填料粒径5μm流动相：甲醇A‑0.05％磷酸水溶液B，梯度洗脱，见流动相梯度表流速：1.0ml/mim检测波长：280nm，232nm柱温：30℃进样体积：10μl流动相梯度表。