自删除质粒

摘要

提供了制备无选择标记基因的质粒的方法，包括在不能实现位点特异性重组酶靶位点之间的重组的宿主细胞环境中培养含有选择标记基因的质粒，选择标记基因的侧翼为位点特异性重组酶靶位点，随后在能实现位点特异性重组酶靶位点之间的重组的另一宿主细胞环境中培养所述质粒，从而去除所述选择标记基因。还提供了通过所述方法制备的质粒在制备用于治疗和疫苗目的的重组蛋白、制备治疗性DNA和DNA疫苗以及使用活细菌载体向患者递送重组蛋白和DNA中的用途。

主权项

制备无选择标记基因的质粒的方法，所述方法包括以下步骤：a)在第一细胞内环境中培养含有选择标记基因的质粒，所述选择标记基因的两边侧翼为位点特异性重组酶靶位点，所述第一细胞内环境不能实现所述位点特异性重组酶靶位点之间的重组，所述位点特异性重组酶靶位点选自Ecdif、cer、psi、pif或mwr，其中所述第一细胞内环境中的编码PepA、ArgR或ArcA的基因中的一个或多个中发生突变，使得编码PepA、ArgR或ArcA的基因中的一个或多个失活，其中所述质粒包含附属蛋白的附属序列，并且所述附属序列与所述位点特异性重组酶靶位点能形成二聚化作用天然形成的同向重复二聚体解离位点；以及b)随后在第二细胞内环境中培养所述质粒，所述第二细胞内环境能够实现所述位点特异性重组酶靶位点之间的重组，从而去除所述选择标记基因，所述第二细胞内环境包含ArgR或ArcA和PepA的活性形式，并包含选自XerC或XerD的位点特异性重组酶。