主权项 |
一种小儿七星茶制剂氨基酸指纹图谱的检测方法,其特征在于,采用高效液相色谱进行检测,包括以下步骤:(1)对照品溶液的配制:将甘氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、组氨酸、丝氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、精氨酸、色氨酸、谷氨酸对照品各取10mg,分别用体积百分比浓度为28‑32%的乙醇溶液溶解并定容至20mL,摇匀;将胱氨酸、酪氨酸各取10mg,分别用0.08‑0.12mol/mL盐酸溶解并定容至20mL,摇匀;得19种氨基酸溶液;分别吸取上述氨基酸溶液,分别加入体积百分比浓度为15.5‑16.5%的三乙胺的乙腈溶液、体积百分比浓度为1.75‑1.85%的苯异硫氰酸酯的乙腈溶液,涡旋混匀,室温放置0.8‑1.5h,加入正己烷萃取,取下层溶液,微孔滤膜滤过,得19种氨基酸单一对照品溶液;取等量的上述19种氨基酸单一对照品溶液,构成19种氨基酸混合对照品溶液;(2)供试品溶液的制备:取小儿七星茶制剂样品,上阳离子树脂,先用蒸馏水洗脱,弃去水洗液;再用1.8‑2.2mol/L氨水洗脱,收集氨洗液;再用0.8‑1.2mol/L氨水洗脱,收集氨洗液;将上述氨洗液减压浓缩,吸取浓缩液,加入体积百分比浓度为15.5‑16.5%的三乙胺的乙腈溶液、体积百分比浓度为1.75‑1.85%的苯异硫氰酸酯的乙腈溶液,涡旋混匀,室温放置0.8‑1.5h,加入正己烷萃取,取下层溶液,微孔滤膜滤过,得供试品溶液;所述小儿七星茶制剂样品为小儿七星茶糖浆、小儿七星茶口服液或用蒸馏水溶解后的小儿七星茶颗粒;(3)测定:分别进样所述19种氨基酸混合对照品溶液、供试品溶液,注入高效液相色谱仪测定;所述高效液相色谱仪的条件为:色谱柱以碳十八烷基硅烷基键合硅胶为填料,流动相:0.025mol/L乙酸钠溶液为流动相A,乙腈为流动相B,采用梯度洗脱方式;流速:1mL/min;检测波长:254nm;所述梯度洗脱的流动相条件如下:<img file="FDA0000678667240000021.GIF" wi="2055" he="532" /> |