利用蛇足石杉细胞和内生真菌共培养富集石杉碱甲的方法

摘要

本发明涉及一种蛇足石杉细胞培养生产石松生物碱技术，按照如下步骤进行：(1)生产石杉碱甲的蛇足石杉人工驯化培养；(2)蛇足石杉单细胞获取；(3)蛇足石杉-内生真菌共培养体系的建立；(4)活细胞的观察计数；(5)石杉碱甲及麦角甾醇的提取；(6)石杉碱甲及麦角甾醇的检测。即用HPLC分别检测该体系中石杉碱甲和麦角甾醇的含量，流动相分别为甲醇：0.08mol/L醋酸铵(25∶75，v/v)，甲醇∶水(95∶5，v/v)。通过两者的含量变化发现该体系中内生真菌对石杉碱甲含量的提高无显著影响，且石杉碱甲的含量在第4天达峰值，比原始含量增加33.05％，此时可收获或继代培养。本发明在蛇足石杉未彻底灭菌的前提下，富集了该体系中的石杉碱甲，此过程快捷且经济。

主权项

利用蛇足石杉细胞和内生菌共培养富集石杉碱甲的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)生产石杉碱甲的蛇足石杉人工驯化培养；(2)蛇足石杉单细胞获取；(3)蛇足石杉‑内生菌共培养体系的建立；(4)活细胞的观察计数；(5)石杉碱甲及麦角甾醇的提取；(6)石杉碱甲及麦角甾醇的检测；(7)分析石杉碱甲含量随培养时间的变化趋势，得出最佳收获时间以富集石杉碱甲或者进行继代培养。