一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法及应用

摘要

本发明涉及制作基因敲除动物模型的领域，具体讲，涉及一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法及应用。其制备方法为：分别构建打靶载体；将打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕动物体内，与正常动物交配；对得到的嵌合体动物进行基因型验证，筛选基因成功敲除的阳性基因敲除的嵌合体动物；进一步与野生型动物交配，获得F1代杂合子；F1代杂合子之间交配后获得两条染色体均被剔出的GGTA1和iGb3S纯合子动物；再将GGTA1和iGb3S纯合子动物进行交配，筛选GGTA1和iGb3S同时缺失的双基因敲除纯合子动物，并建系获得基因敲除动物种群。

主权项

一种制备GGTA1和iGb3S双基因敲除的非人哺乳动物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建打靶载体：分别从基因组DNA中分离GGTA1和iGb3S基因，经长链PCR方法扩增获得同源臂，与抗生素耐药基因复合构建GGTA1打靶载体和iGb3S打靶载体；(2)将GGTA1打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕动物体内，与正常动物交配；对得到的嵌合体动物进行基因型验证，筛选基因成功敲除的阳性基因敲除的嵌合体动物；进一步与野生型动物交配，获得GGTA1的F1代杂合子；(3)将iGB3S打靶载体转入到胚胎细胞，将重组胚胎细胞注入代孕动物胚胎中，移植到假孕动物体内，与正常动物交配；对得到的嵌合体动物进行基因型验证，筛选基因成功敲除的阳性基因敲除的嵌合体动物；进一步与野生型动物交配，获得iGB3S的F1代杂合子；(4)将GGTA1的F1代杂合子和iGB3S的F1代杂合子之间交配后获得两条染色体均被剔出的GGTA1和iGb3S纯合子动物；(5)再将GGTA1和iGB3S纯合子动物进行交配，筛选GGTA1和iGb3S同时缺失的双基因敲除纯合子动物，并建系获得基因敲除动物种群。