从诸葛菜中提取抗菌肽的方法

摘要

本发明为从诸葛菜中提取抗菌肽的方法，解决从动物和微生物源提取抗菌肽成本高，从其它植物提取抗菌物质提取率低的问题。（1）将诸葛菜研磨成浆，加入可溶蛋白提取缓冲液，浸提、过滤、离心分离，取上清液；（2）将上清液加入（NH₄）₂SO₄至饱和度35-45%、离心分离，再得上清液，加入（NH₄）₂SO₄至饱和度75-85%，离心分离，将沉淀溶于离子交换层析缓冲液Ⅰ中透析，得蛋白质粗提液；（3）将蛋白质粗提液上离子交换层析柱，用离子交换层析缓冲液Ⅰ淋洗，再用离子交换层析缓冲液Ⅱ进行洗脱，检测各洗脱峰的抑菌活性收集活性组分；（4）将活性组分用离子交换层析缓冲液Ⅰ透析，再作透析，抽真空浓缩，将浓缩液上分子筛层析柱，洗脱检测抑菌活性，收集活性组分，将活性组分浓缩得诸葛菜抗菌肽。

主权项

从诸葛菜中提取抗菌肽的方法，其特征在于如下步骤：（1）将诸葛菜研磨成浆，加入可溶蛋白提取缓冲液，在3—5℃浸提、过滤、离心分离滤液，弃沉淀，取上清液；  （2）将上清液边搅拌边加入（NH₄）₂SO₄至饱和度35—45%、3—5℃静置、离心分离，再得上清液，再加入（NH₄）₂SO₄至饱和度75—85%，静置，离心分离，将沉淀溶于离子交换层析缓冲液Ⅰ中透析，得到蛋白质粗提液；（3）离子交换层析，将蛋白质粗提液上预先用洗脱液平衡好的离子交换层析柱，用离子交换层析缓冲液Ⅰ淋洗至基线，再用离子交换层析缓冲液Ⅱ进行洗脱，检测抑菌活性收集活性组分；（4）将上述所得活性组分用离子交换层析缓冲液Ⅰ透析，再用凝胶过滤缓冲液作透析，再抽真空浓缩，将浓缩液上分子筛层析柱，用凝胶过滤缓冲液洗脱，检测抑菌活性，收集活性组分，将活性组分冷冻干燥得抗菌活性干粉，离子交换层析缓冲液Ⅰ为20mol/L pH6.2磷酸缓冲液，离子交换层析缓冲液Ⅱ为每升离子交换层析缓冲液Ⅰ中加入1mol NaCl，洗脱液和凝胶过滤缓冲液为50mol/L pH7.0磷酸缓冲液加0.1mol/L NaCl，可溶蛋白提取缓冲液为50mol/L pH7.0磷酸缓冲液加0.1mol/L KCl和2mM EDTA，离子交换层析柱为CM—52；分子筛层析柱为SephadexG—50。