叶酸偶联羧甲基壳聚糖纳米粒作为光控释放NO载体的制法

摘要

本发明涉及叶酸偶联羧甲基壳聚糖纳米粒作为光控释放N0载体的制法，该方法具体包括以下步骤：首先，羧甲基壳聚糖与叶酸发生偶联反应生成羧甲基壳聚糖-叶酸偶联物；然后，该偶联物在Roussin粗苏打钠盐(RBS)存在下发生物理交联生成负载此钠盐的偶联物纳米粒，即羧甲基壳聚糖-叶酸-RBS复合纳米粒。与现有技术相比，本发明方法简单，快捷、成本低，制备产物具有生物相容性，偶联了药物载体主动靶向因子叶酸，负载了光照释放一氧化氮的供体，该产物可发展为兼具叶酸受体靶向和细胞内光控释放一氧化氮功能的纳米粒载体，本发明将为高效的壳聚糖药物载体和其它纳米载药体系的研究提供了一种新的发展方向。

主权项

一种叶酸偶联羧甲基壳聚糖纳米粒作为光控释放NO载体的制法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：(1)称取质均分子量400kDa，脱乙酰度90％，羧甲基度1.112的羧甲基壳聚糖粉末(CMC)溶于去离子水，用0.22μM滤纸过滤后制成CMC水溶液，向其中滴加NaOH溶液，调节pH值为碱性，在避光下加入叶酸(FA)，磁力搅拌均匀，升高至一定温度下反应；(2)将反应后产物冷却至室温，用凝胶柱分离，于某一波长处监测洗脱过程，收集洗脱时流出的第一波峰的溶液，然后将其冷冻干燥，得到叶酸偶联的羧甲基壳聚糖(CMC‑FA)偶联物；(3)将所得CMC‑FA偶联物溶于1％醋酸水溶液，制得CMC‑FA的醋酸溶液，加入Roussin粗苏打盐Fe₄S₃(NO)₇^‑(RBS,Na⁺盐)，在磁力搅拌下滴加多聚磷酸钠水溶液，然后继续搅拌反应，即得负载RBS的CMC‑FA纳米粒混悬液；(4)所得混悬液被超速离心，弃除上清夜，收集沉淀物，分散在去离子水中，冷冻干燥，冻干样研磨至粉末状，即为CMC‑FA‑RBS纳米粒；步骤(1)中所述的CMC浓度1～10mg/mL，pH 7～9，CMC与FA质量比5～10:1，反应温度50～100℃，反应时间30～120min；步骤(2)中所述的监测波长为360～370nm，冷冻干燥时间12～24h；步骤(3)中所述的CMC‑FA的醋酸溶液浓度5～10mg/mL，RBS钠盐浓度0.1～0.5mmol/L，多聚磷酸钠浓度0.5～1.0mg/mL，反应时间30～120min；步骤(4)中所述的离心速度5000～14000rpm/min，离心时间30～60min，冷冻干燥时间12～24h。