一步均相化学发光法进行小分子检测的方法及所用微粒

摘要

本发明公开了一种用于兽药小分子检测的微粒，包括受体微粒和供体微粒，首先，用兽药分子标记载体蛋白；其次将标记好兽药分子的载体蛋白偶联在均相化学发光受体球珠上去；然后，制备偶联有兽药分子抗体的均相化学发光供体球珠。本发明还公开了利用上述微粒采取的一步均相化学发光法进行小分子检测的方法。本发明提供的一步法均相化学发光技术，用于均相、快速、高灵敏度的兽药残留检测，以及用于饲料中常见的兽药成分含量测试，如克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林等。

主权项

用于兽药小分子检测的微粒，包括受体微粒和供体微粒，其特征是：一、受体微粒的制备方法为包括如下步骤：①、将兽药小分子和载体蛋白偶联，经PBS透析，得到标记有兽药小分子的载体蛋白；所述兽药小分子与载体蛋白的摩尔比为10～50:1；②、按照每0.05mmol的ATTA‑Eu³⁺配用0.9～1.1g聚苯乙烯微球的用量比，在ATTA‑Eu³⁺中加入聚苯乙烯微球溶液，超声包裹；得到含均相化学发光受体微粒的溶液；③、在均相化学发光受体微粒表面包被标记有兽药小分子的载体蛋白：将步骤②所得的含均相化学发光受体微粒的溶液进行清洗，得清洗后均相化学发光受体微粒；取清洗后均相化学发光受体微粒0.2ml，加入0.09～0.11mg标记有兽药小分子的载体蛋白，再加入9～11uL浓度为350～450mM的氰基硼氢化钠溶液，室温旋转反应18～24hrs后终止反应；所得的反应液经后处理，得标记有兽药小分子‑载体蛋白的均相化学发光受体微粒；二、供体微粒的制备方法为：将醛基化AlphaLISA供体微球与上述兽药小分子相对应的抗体相偶联；包括如下步骤：含有1mg醛基化AlphaLISA供体微球的溶液经离心和分散沉淀的处理后，加入0.09～0.11mg与上述兽药小分子相对应的抗体和9～11uL浓度为350～450mM的氰基硼氢化钠溶液，室温旋转反应18～24hrs后终止反应；所得的反应液经后处理，得带有兽药小分子抗体的均相化学发光供体微粒。