一种铁皮石斛化学消毒组培方法

摘要

本发明涉及一种铁皮石斛化学消毒组培方法。铁皮石斛的化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的铁皮石斛化学消毒组培方法，利用化学试剂达到灭菌或抑菌的目的，在配制培养基的过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了铁皮石斛组培环节；并且操作简单，只要按不同的培养基配方配制即可；实用性强，推广性好，还可以有效降低铁皮石斛的组培成本，一般可降低成本10％以上。

主权项

一种铁皮石斛化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L乳酸链球菌素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为MS+1～3mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：MS+1.0～2mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；壮苗培养基为MS+0.1～0.5mg/L 6‑BA+0.5～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5～1.5mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+10～50mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌吟；所述NAA，指〆‑萘乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容、然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)诱导培养：取健壮的铁皮石斛茎段，剪除叶、根，洗净后在无菌操作台上切成带有茎节的1～2cm小段，于体积比为75％酒精中浸20s，然后在重量比为0.1％升汞溶液中消毒10～20min，取出用无菌水冲洗3次后，接种于诱导培养基上，培养40d后出现黄绿色斑点，60d后斑点变绿出现小芽；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；(4)增殖培养：将诱导培养的小芽转入增殖培养基中，每30d转接一次，大量增殖丛生芽；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；(5)壮苗培养：将增殖培养的丛生芽接种到壮苗培养基上，培养30d成为丛生芽苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1400lx；(6)生根培养：取壮苗培养的高度为4～6cm的丛生芽苗，切成单株，接种到生根培养基上，25d后形成完整植株；培养室温度为25℃，光照12h，光照强度为1500lx；(7)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后移栽至铁皮石斛的栽培基质，所述栽培基质，指含有占基质体积为1/2的发酵后的花生壳、或发酵后的松树皮(或泥炭、或锯末、或上述各原料的混合物，以及占基质体积1/2的碎石、珍珠岩，然后，在基质表面覆以苔藓；大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为15～30℃。