一种利用UPLC-Q-TOF/MS技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法

摘要

一种利用UPLC-Q-TOF/MS技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法，属于超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱UPLC-Q-TOF/MS检测技术领域。本发明通过标准品的准备、样品前处理、色谱条件、质谱条件和寡聚古罗糖醛酸定性定量方法的建立等步骤快速测定寡聚古罗糖醛酸。本发明快速、准确的检测了寡聚古罗糖醛酸，并给出寡聚古罗糖醛酸在质谱中的母离子及碎片离子的特征，从而不仅可以实现对样品中古罗糖醛酸单糖到四糖的准确定性定量，同时可根据质谱信息对样品中可能含有的未知寡聚古罗糖醛酸进行推测、解析。

主权项

一种利用UPLC‑Q‑TOF/MS技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法，其特征在于步骤为：（1）标准品的准备：准备古罗糖醛酸单糖G1、古罗糖醛酸二糖G2、古罗糖醛酸三糖G3、古罗糖醛酸四糖G4；（2）样品前处理：将含寡聚古罗糖醛酸样品以超纯水溶解，配成浓度为0.1g/mL溶液，过0.22μm滤膜后待测；（3）色谱条件：色谱柱 ACQUITY UPLC CSH C18 Column，2.1 mm×100 mm，1.7μm，流动相为乙腈A相和0.1%甲酸B相，流动梯度洗脱程序：0‑1 min，2% A+98 %B；1‑15min，2 %A+98%B～60%A+40%B；15‑17 min，60%A+40%B～100 %A，流速0.3mL/min，柱温：45℃，进样量 1μL；（4）质谱条件：质谱仪WATERS MALDI SYNAPT‑Q‑TOF/MS，电喷雾离子源，负离子扫描模式，离子源温度100℃，脱溶剂温度400℃，脱溶剂气流量700L/h，锥孔气流量50 L/h，扫描范围50‑2000Da，一级质谱锥孔电压30 V，裂解能量6eV，扫描时间1s；（5）寡聚古罗糖醛酸定性定量方法的建立：具有标准样品下，采用外标法定量；将4种标准品G1‑G4配成等质量浓度的混合标准储备液，并用乙腈‑水溶液逐级稀释使4种寡聚古罗糖醛酸含量均分别为15、30、50、75、100、125、150mg/L，以每个浓度下每个寡聚古罗糖醛酸对应的母离子提取离子色谱图中的积分峰面积为纵坐标，混合标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线；G1‑G4分别对应的母离子依次为：G1选择m/z 193、G2选择m/z 369、G3选择m/z 545、G4选择m/z 721；检测样品时，根据样品在同一保留时间处对应的提取离子积分峰面积值，根据标准曲线方程，获得对应寡聚古罗糖醛酸的含量。