丙烯酸树脂降解菌的筛选鉴定及其降解性能研究方法

摘要

本发明涉及丙烯酸及脂类废料处理技术领域，具体涉及丙烯酸树脂降解菌的筛选鉴定及其降解性能研究方法。通过废水采用进行丙烯酸降解菌株的培育，然后研究丙烯酸降解菌株在不环境因素下的生长状况和降解效果，为丙烯酸废水处理提供了一种新的方法。

主权项

丙烯酸树脂降解菌的筛选鉴定及其降解性能研究方法，其特征在于：它的培育筛选及其降解性能研究方法：1.1菌种来源及培养基菌种分离自某汽车喷涂车间排污口污泥营养培养基：蛋白胨2.5 g、牛肉膏0.75 g、NaCl1.25 g、蒸馏水250 mL；固体营养培养基：蛋白胨2.5 g、牛肉膏0.75g、NaC1 1.25g、蒸馏水250mL、琼脂5g；无机盐培养基：NaC10.5g、NH₄N0₃0.4g、KHZP0₄1.Og、KZHP0₄1.Og、酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为7.2；微量元素液：MgS0₄2.Og、CuS0₄0.5g、MnS0₄0.5 g、FeS0₄·7H₂0 O.5g、CaC1₂0.5g、蒸馏水5OOmL；降解用无机盐培养基：NaCl O.5g、NH₄N0₃0.4g、KHZP0₄1.Og、KZHP0₄1.Og、酵母浸粉0.2g、微量元素液4mL、丙烯酸废水1000mL、调pH值为7.2；1.2菌种培养1.2.1丙烯酸高效降解菌的筛选 (a)制备菌液:将汽车涂装废水排污口污泥加入无菌水中，汽车涂装废水排污口污泥的浓度为0.08g/mL，摇床避光培养24h，得到菌悬液；在灭菌后的无机盐培养基中接种菌悬液，菌悬液的接种量为无机盐培养基体积的5%，30℃，30r/min条件下摇床避光培养7d，得到菌液；(b)制备丙烯酸树脂降解菌系：将葡萄糖加入制备的菌液中，按菌液体积的5%接种丙烯酸废水，摇床避光进行传代培养，得到丙烯酸树脂降解菌系培养液；每次传代培养时菌液中葡萄糖的量均比上一代减少1/5，丙烯酸废水的量均比上一代增加，每次增加量为菌液体积的5%，每次传代培养7d，传代培养妻五代，最后一代培养时培养基中不再添加葡萄糖； (c)选丙烯酸树脂降解菌系：往无机盐培养基中加入琼脂，灭菌后，待无机盐培养基凝固后加入经梯度稀释的丙烯酸树脂降解菌系培养液并涂布均匀，30℃培养7d，挑取周围有透明圈的菌落，重复进行接种培养并划线分离，得到纯化的丙烯酸树脂降解菌系；1.2.2菌株的保藏将筛选出来的丙烯酸高效降解菌株接种于固体营养培养基中，长出菌落后，制备成浓度为OD₆₀₀=1的菌液，并于4℃的冰箱中保存备用；由于微生物具有易突变的特点，因此对冰箱中保存的菌种每两个月转接一次，以减少菌株的突变性；1.2.3生理生化指标测定    对菌株进行系列生理生化特性实验，参照《简明第8版伯杰氏细菌鉴定手册》进行鉴定；并采用紫外可见分光光度计在波长600nm处测定培养液的光密度值来表征细菌生长量；1.2.4 16S rDNA鉴定利用Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取细菌DNA；用于16S rDNA PCR反应的引物为一对通用引物；正向引物为7F：5'‑CAGAGTTTGATCCTGGCT‑3'；反向引物为1540R：5'‑AGGAGGTGATCCAGCCGCA‑3'；PCR反应条件：94℃/4min、94℃/45sec、55℃/45 sec、2℃/lmin，循环30次；72℃/l0min，1%琼脂糖凝胶电泳检测；PCR产物的测序由上海生工生物工程股份有限公司完成；高效降解菌株16S rDNA序列通过Blast程序与RDP II中核酸数据进行比对分析；1.2.5菌株对丙烯酸树脂的降解能力的测定将筛选得到的高效降解菌株接种到含丙烯酸树脂的无机盐培养基中培养7d变化设置3个平行及一个空白对照，培养结束后通过测定培养液COD的表征丙烯酸树脂的降解效率。