培育活体蛹化冬虫草的工艺

摘要

培育活体蛹化冬虫草的工艺，其特征在于：包括以下步骤，一、培育活体蛹化冬虫草菌种，其中将母本菌种接种至琼脂培养基上培养再生母种；二、准备寄主虫蛹，并对寄主虫蛹进行消毒处理，三、在无菌环境中一次性喷雾接种；四、活体蛹化冬虫草培养，包括染菌期培养、转色期培养、出座期培养。本发明技术采用直接在活体虫蛹上喷洒液体菌种的方式进行接种，其可操作性强，效率高。同时，因接种时没有对活体虫蛹产生伤害，所以虫蛹的成活率高，且接种后培养温度可以控制在18℃以上，操作难度大大降低，可实现冬虫夏草的规模化生产。

主权项

培育活体蛹化冬虫草的工艺，其特征在于：包括以下步骤一、培育活体蛹化冬虫草菌种(1)培养活体蛹化冬虫草母本菌种a采集野生冬虫草菌株，利用有性克隆技术获得冬虫草母本孢子；b挑取单孢繁殖复壮母本原生菌种，经过变温培养、驯化、提纯，最终获得母本菌种，恒温储存备用；(2)培养再生母种将母本菌种接种至琼脂培养基上，18℃‑20℃恒温暗光培养8‑10天，菌丝布满表面呈金黄色即成再生母种；(3)培养液体菌种将再生母种接于液体菌种培养液中，18℃‑20℃范围内静止培养72小时，通氧浮动培养48小时，当圆球状微粒菌球充满液体培养基停止通氧，经检验、分析、提纯后即可储存备用；二、准备寄主虫蛹选择健壮、丰满的鳞翅目活体虫蛹作为蛹化冬虫草虫草菌的寄主虫蛹；并对寄主虫蛹进行消毒处理，处理方法为(1)紫外线或臭氧灭菌30分钟或(2)75％酒精灭菌2‑3分钟；三、虫蛹接种在无菌环境中一次性喷雾接种；四、活体蛹化冬虫草培养(1)染菌期培养，在暗光下，温度保持在18℃‑19℃，湿度保持在50％，早晚各通风10分钟，活体虫蛹在28‑32天生命体征消失，45‑55天体内被虫草菌完全侵染，活体虫蛹形成僵硬的菌核，染菌期结束；(2)转色期培养，在200勒克斯光线下每天照射10‑12小时，温度保持在18℃‑20℃，湿度保持在55％‑60％，早晚各通风15‑20分钟，培养8‑12天，虫蛹体表呈金黄色，头部或间节部位出现米粒状物，转色期培养阶段结束；(3)出座期培养，分为前期、中期和后期培养三个阶段；前期培养阶段，在自然散射光线照射下，温度保持18℃‑19℃，湿度保持55％‑60％，早晚各通风20‑25分钟培养8‑12天，子座长到1.8‑2.2cm，前期培养束；中期培养阶段，在自然散射光线照射下，温度保持在18℃‑19℃，湿度保持在60％‑70％，早晚各通风25‑30分钟，培养8‑12天，子座长到3.8‑4.2cm，中期培养管理阶段结束；后期培养阶段，在自然散射光线照射下，温度保持18℃‑19℃，湿度保持80％‑85％，早晚各通风35‑40分钟，培养8‑12天，子座长到4.8‑5.2cm，顶端膨大呈椭圆形，外表出现粉末状物，色泽金黄，后期培养管理阶段结束；将成熟后的子座收集保存。